单精注射步骤 一、精子获能处理 将采集的精子液化15-20 min，取液化好的精子上清加入到15 ml离心管内；在精子离心管内加入4 ml的TH3，轻轻吹打，1,800 rpm，离心5分钟；离心完后去上清 二、单精子显微注射 将TH3显微注射操作皿做好预热：取200 μl TH3液，在显微操作碟内制备4-5滴TH3液滴和一个柱状TH3液滴，再做一个10% PVP的液滴，每滴体积15-20 μl，并覆盖矿物油 3-5

取出的精子一般需要进行分装，单次ICSI实验需要使用的精子数量很少，因此可以进行大幅度的稀释，分装后的精子保存于-80度冰箱可以长期储存，待使用前解冻即可注射前，使用超声清洗机超声精子10秒，将精子的头与尾部断开 （四）卵胞质内单精子注射使用CZB、KSOM制作培养皿，每100ul的培养液宜制作6个液滴，每个6CM培养皿应含有30个液滴以上(以便具有足够的新鲜溶液进行充分洗涤)，加完培养液后，使用矿物油封住液面， 调

... 清洗滴（mHTF），胚胎按照图中白色箭头方向清洗转移二、 操作流程精子的采集及获能卵母细胞采集（如图2-D,E,F）：将注射hCG的供体小鼠（15-17h后）断颈处死，酒精消毒。 在受精后6h，可观察到含有第二极体和两个原核的受精卵细胞，同时含有单原核的孤雌生殖卵母细胞，这种细胞需剔除。移卵针的挑选。 46-48h后，腹腔注射hCG，每只5IU（0.1mL）。 试剂 注射用血促性素（PMSG, Pregnant Mare Serum Gonadotropin）(宁波市三生药业有限公司, 规格:10