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微生物群落胞内/胞外吸附/胞外游离水环境DNA的分离提取
Isolation and Extraction of Intracellular, Absorbed-extracellular and Free-extracellular Environmental DNA from Aquatic Microbial Community
Authors:  赵泽鞠峰 and date: 12/25/2020, view: 7664, Q&A: 0
水样吸附DNA的分离提取 按照水样游离DNA的提取实验步骤,从2.2所得滤液中提取吸附DNA。 环境水样预处理2.1环境水样经0.2 μm滤膜过滤,滤膜置于4 °C储存,用于后续DNA吸附DNA的分离,滤液用于后续游离DNA的提取。
土壤病毒组富集及DNA提取
Enrichment and DNA Extraction of Soil Virome
Authors:  韩丽丽毕丽, 于丹婷, 张丽梅, 贺纪正 and date: 04/13/2021, view: 3453, Q&A: 1
然后用DNase I处理病毒浓缩液,于37 ℃ 孵育1 h (10 units DNaseI/500 μl),用于去除浓缩液中游离DNA。 除甘氨酸缓冲液,还可以使用其它的缓冲液 ( Williamson et al., 2003;韩丽丽等, 2017),例如1%柠檬酸钾。 由于病毒基因组小,不能通过凝胶电泳的方法证明是否成功提取到了足够的病毒DNA,可能后期还需要通过病毒DNA的全基因组扩增放大DNA的量,通常使用的全基因组扩增方法如phi2
细胞外囊泡的流式检测
Flow Cytometric Analysis of Extracellular Vesicles
Authors:  闵娟关武祥 and date: 11/20/2019, view: 7817, Q&A: 0
失败经验电穿孔 (Electroporation) 也叫电转染,是通过高强度的电场作用,在细胞膜上形成直径约10 nm的小孔,细胞的物质通过小孔进入内;电击形成的小孔会随着膜磷脂的流动性而在数分钟内自行修复 以蔗糖密度梯度 (15%~60%) 离心去除游离量子点,最后收集微囊泡层。 这种技术可以将核苷酸、DNA与RNA、蛋白、糖类、染料及病毒颗粒等导入原核和真核细胞内。相对其他物理和化学转化方法,电转化操作简便、瞬时高效、无需外源性转染试剂。 流式细胞仪对EVs的检测尤为关键,普通流式检测检测下限为200~500 nm