Microinjector（Narishige）一对显微操作臂（Narishige）微量注射器（Narishige IM-9B）实验步骤实验流程 超排母猴及获取卵母细胞；单精注射获取受精卵；进行胚胎胞质内 出现两个原核的胚胎视为正常受精；用胚胎转移管将一组受精卵转移到操作皿中，操作尽可能在20-30

（六）胞浆注射将离心完的核酸或其他溶液上清通过配套的微量注射枪头经底部加入胞浆注射针（微量注射时，2 μl溶液就足以完成数小时的注射），将针头向下静置数分钟（也可以用胶带纸粘在实验台上），可以明显观察到针尖端的空气慢慢被液体替换 将持卵针与充分静置后的注射针安装上显微操作仪，注射针的角度应尽可能的平（因为胞浆注射针无法像其他显微操作的注射针一样弯折角度，为了确保注射后受精卵的存活率，应尽可能降低注射针与载物台的夹角，详情见图1） 在20倍镜下，先用一些状态差的受精卵测试压力，将注射针轻轻

材料与试剂3.5 cm 培养皿（CORNING，catalog number: 430165）3.5 cm 操作皿（FALCON，catalog number: 353001）Borosilicate Glass（B100-75-10）矿物油（Sigma，catalog number：M8410）口吸管（北京正天，catalog number：BJ-40）移液枪 （Eppendorf）15 ml 离心管（Corning，catalog number：430791）一次性使用无菌注射器带针（KDL 1ml）PVP（Sigma，catalog number：PVP360）水银TH3液（见溶液配方）

胞质显微注射 在下午2时左右（沙鼠原核期受精卵比例最高），将上午10时左右培养的沙鼠受精卵取出，在M2培养基中清洗一次后，用口吸管将受精卵转移到显微注射的M2微滴中，用显微注射仪将Cas9/gRNA体系注射到长爪沙鼠受精卵的胞质中...