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生物钟调控基因的高通量siRNA筛选
A high-throughput siRNA Screen for Circadian Clock Modulators
Authors:
李慧林
欧家丽
,
唐芸棋
and
date:
06/01/2021,
view:
2025,
Q&A:
0
SD值为标准差;C.V值为离散系数,用于评估组内数据的离散程度;Z-factor也被称作Z-因子,用于评估
筛选
体系是否适合高通量
筛选
,Z-factor值介于0.5-1.0之间时,证明
筛选
体系适合进行高通量
筛选
细胞数量过少或太多 在正式
筛选
开始前,应根据实验目的和
筛选
策略,选择大致的细胞密度范围进行预实验,以确定
筛选
时的细胞密度。细胞悬液制备时,应采用多次计数求平均值的方法。 根据alamarBlue值的计算,C.V值较小,证明孔间细胞数量基本一致;在生物发光值的检测中
高通量siRNA文库筛选体系的建立及优化
High-Throughput siRNA Library Screening Assay Development and Optimization
Author:
韩帅
date:
10/22/2021,
view:
3944,
Q&A:
0
阴阳性对照的选择
siRNA
筛选
中使用的阴性对照指一段随机序列的
siRNA
,不靶向基因组中任何表达基因,推荐使用与
siRNA
筛选
文库配套的阴性对照
siRNA
。 高通量
siRNA
文库
筛选
流程从具体操作步骤来讲,笔者单位开展正式高通量
siRNA
文库
筛选
的常规流程如图2。共有四个大的步骤:
siRNA
文库制备及分装。 四、展望—
siRNA
筛选
与CRISPR
筛选
siRNA文库存储板的制备方法
Preparation of whole genome siRNA library
Authors:
杨荣超
韩 帅
,
陈 铭
and
date:
08/20/2021,
view:
2412,
Q&A:
0
在开展
筛选
实验前,将工作板内的
siRNA
整板转移至
筛选
项目所用的指定实验板内用于整板转染和
筛选
。图1. 从多个
siRNA
筛选
项目的结果来看,两种文库制备流程均可得到质量合格的
siRNA
筛选
文库 (Mao et al., 2016;Li et al., 2017;Lu et al., 2019;Wang et 为制备成最终可以直接分装至细胞实验板内开展RNAi
筛选
的
siRNA
溶液,我们利用Beckman公司的Biome
基于反应元件的调控因子筛选——双荧光报告基因法
Dual Fluorescence Reporter-based siRNA Screening of Transcription Regulators of Response Elements
Authors:
郝子健
李正威
,
杨凡
,
胡荣贵
and
date:
07/26/2021,
view:
4071,
Q&A:
0
siRNA
筛选
体系中的表现(CV与Z’值)。 二、
siRNA
文库初筛正式
筛选
实验开始前,请进行预实验,摸索最适的
筛选
条件(包括阴性对照
siRNA
的种类、转染试剂的种类和体积、细胞接种的密度等),见表1。表 1 . 因为即便用流式检测的方式得到的荧光强度变化很接近的细胞株,在
siRNA
筛选
体系下,也会出现较大的差异。 本次
筛选
文库含有6块384孔板。96孔板的每个孔对应384孔板的2孔*6块板=12孔。384孔板的每个孔对应 0.05