一、视频摘要
鉴定基因型是植物遗传学研究的基本实验技能,提取DNA是基因型鉴定的第一步。AB液法是一种快速提取DNA的方法,DNA质量满足PCR、测序等后续实验要求。其原理是植物组织在由吐温20和NaOH构成的去垢剂中加热,破坏膜结构并释放DNA,再加入由Tris-Hcl和EDTA-Na2构成的缓冲液以稳定DNA。相较于CTAB、SDS、TPS等精提方法,AB液提取的DNA质量稍差但速度更快。
二、关键词
提取DNA、基因型鉴定、AB液
三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1. 样品信息
水稻叶片(-20℃保存)
2. 试剂和耗材
试剂:
-
20%吐温20(V/V)
-
5M
NaOH
-
1M
Tris-HCl pH 8.0
-
0.5M
EDTA-Na2 pH 8.0
耗材
-
PCR板及橡胶盖板
3. 仪器和软件
1.
pH计
2.
PCR仪
3.电磁搅拌器
四、实验操作
1. 按如下比例配置A液和B液。
A液:10ml
20%吐温20、2ml
5 M NaOH和88
ml纯水混匀。
B液:10ml
1M Tris-HCl pH8.0、0.4ml
0.5M EDTA-Na2 pH8.0和纯水89.6
ml混匀。
2. 每个样品需1cm左右的幼嫩叶片,将叶片剪成2mm左右的片段,样品按一定顺序加入PCR板的反应孔中。
3. 每个反应孔加入80μl
A液,盖上橡胶盖板,PCR仪上95℃加热10min,冷却后加入80μl
B液,吹打均匀即可使用。
五、注意事项
1.
A液久置易产生沉淀,需现配现用。
2. 提取的DNA可在4℃存放1月,建议现提现用。
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