首页     短视频

AB液法提取DNA

孔辉 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1000
观看次数: 40 次  复制链接
视频简介使用AB液提取水稻叶片中的DNA。A液是去垢剂由吐温20和NaOH构成,B液是TE缓冲溶液由Tris-HCl和EDTA-Na2构成。水稻叶片剪碎后加入80 μl A液,PCR仪上95℃煮10 min,去除部分杂质。再加等量B液,稳定DNA,即可作为PCR反应的DNA模板。本方法具有速度快、省试剂、质量能用的优点。 所用实验方案来自本实验已有成熟方案,并在部分细节处进行优化。本视频讲解了该实验方法的原理、试剂配置、操作流程及注意事项。视频拍摄剪辑采用面向新手的拍摄技巧和讲述风格,可为实验室新人快速掌握该方法提供帮助。
  • 视频介绍

一、视频摘要
鉴定基因型是植物遗传学研究的基本实验技能,提取DNA是基因型鉴定的第一步。AB液法是一种快速提取DNA的方法,DNA质量满足PCR、测序等后续实验要求。其原理是植物组织在由吐温20和NaOH构成的去垢剂中加热,破坏膜结构并释放DNA,再加入由Tris-Hcl和EDTA-Na2构成的缓冲液以稳定DNA。相较于CTAB、SDS、TPS等精提方法,AB液提取的DNA质量稍差但速度更快。


二、关键词

提取DNA、基因型鉴定、AB

三、
实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

水稻叶片(-20℃保存)

2. 试剂和耗材

试剂:

  1. 20%吐温20V/V

  2. 5M NaOH

  3. 1M Tris-HCl pH 8.0

  4. 0.5M EDTA-Na2 pH 8.0

耗材

  1. PCR板及橡胶盖板


3. 仪器和软件

1. pH

2. PCR

3.电磁搅拌器


四、实验操作

1. 按如下比例配置A液和B液。

A液:10ml 20%吐温202ml 5 M NaOH88 ml纯水混匀。

B液:10ml 1M Tris-HCl pH8.00.4ml 0.5M EDTA-Na2 pH8.0和纯水89.6 ml混匀。
2. 
每个样品需1cm左右的幼嫩叶片,将叶片剪成2mm左右的片段,样品按一定顺序加入PCR板的反应孔中。
3. 
每个反应孔加入80μl A液,盖上橡胶盖板,PCR仪上95℃加热10min,冷却后加入80μl B,吹打均匀即可使用。

五、注意事项

1. A液久置易产生沉淀,需现配现用。

2. 提取的DNA可在4℃存放1月,建议现提现用。

声明:该视频作品仅代表作者观点,用于共享科学技术。内容仅供大家参考,不代表本站立场。