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NMY51膜系统酵母感受态制备及转化

肖文文 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1016
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视频简介酵母双杂交是验证蛋白质互作的一个重要方法,NMY51膜系统酵母双杂交可以为膜蛋白互作提供解决方法,本视频讲述了NMY51膜系统酵母感受态的制备及转化过程。
  • 视频介绍

一、视频摘要

酵母双杂交是验证蛋白互作的一个重要方法,通过诱饵蛋白与泛素Cub融合于BD载体,猎物蛋白与泛素Nub融台于AD载体,转入NMY51菌株后,只有蛋白相互作用,泛素才能完整结合,进而被UBPs识别剪切,剪切下来的LexA-VP16 (人工转录因子)进入细胞核,激活下游报告基因表达。NMY51膜系统酵母双杂交为定位在膜上的蛋白提供了解决办法。


二、关键词

膜系统酵母双杂、NMY51DUAL membrane系统


三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息


2. 试剂和耗材

试剂:YPDA培养基、1M LiAC10X TE buffer50% PEG0.9% NaClSingle-stranded carrier DNA3-ATDMSONMY51酵母菌株、SD/-Leu固体培养基等、质粒等(具体参见视频)。

耗材:灭菌枪头、移液枪、离心管、比色皿、酒精灯、酒精喷壶、双面板、冰盒、离心管架、酵母封口膜。


3. 仪器和软件

恒温摇床、离心机、超净工作台



四、实验操作

1. 挑取NMY51单斑于YPDA培养基中,30℃ 220rpm过夜一摇;

2. 吸取一摇菌液于新的YPDA培养基中,30℃ 220rpm摇至OD546=0.6-0.8

3. 2500g 5min收集菌体;

4. 2.5ml ddH2O重悬菌体;

5. 准备PEG/LiOAc master mix

6. 每个反应添加各1.5 ugADBD质粒;

7. 每个反应添加300ul PEG/ LiOAc混液混匀;

8. 每个反应添加100ul重悬细胞,混匀;

9. 42℃,水浴45min

10. 700g 5min

11. 弃上清,NaCl重悬涂板。


五、注意事项

注意药品配制过程,防止污染。

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