小鼠结膜下与玻璃体腔注射

一、视频摘要

玻璃腔注射：玻璃体腔注射是一种具有代表性的眼内注射给药途径，也是从事眼后段疾病研究的科研人员所必须掌握的实验技术。眼球作为一个特殊的独立器官，血—视网膜屏障的存在隔绝了许多药物的运输和作用。玻璃体腔注射可突破血眼屏障,使药物直接在眼内扩散，并作用于视网膜、脉络膜等部位。

结膜下注射：结膜下注射是一种常用的局部给药方式，相对于滴眼液直接点眼来说，将药物注射到结膜下，可使其停留在结膜下疏松结缔组织内，以提高药物在眼内的浓度，增强及延长药物作用时间。

二、关键词

玻璃腔给药，结膜下注射，眼科，小鼠

三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

C57/BL小鼠

2. 试剂和耗材

抗生素滴眼液：可乐必妥；眼表麻醉剂：盐酸奥布卡因滴眼液；扩瞳滴眼液：复方托吡卡胺滴眼液；透明质酸钠滴眼液；金霉素眼膏。

耗材：微量进样针

3. 仪器和软件

小动物麻醉机，手术显微镜，眼科手术显微器械

四、实验操作

（一）玻璃体腔注射

1. 小鼠麻醉及准备：1) 将小鼠置于小动物麻醉机诱导盒内进行吸入式异氟烷麻醉，捏小鼠后肢确认是否麻醉完全2) 将小鼠移到解剖显微镜下，连接鼻锥持续给予异氟烷和氧气3) 待注射眼睛滴加奥布卡因滴眼液防止注射引起局部反射，镊子轻夹结膜确定麻醉完全4）修剪小鼠胡须，防止遮挡术野；清理、消毒小鼠眼睑周围污物及分泌物，防止感染
   
2. 扩瞳：建议双眼散瞳，以防一眼出现意外时可以迅速换眼。
   
3. 维持眼表湿润：使用人工泪液（如玻璃酸钠滴眼液）点眼，防止眼表干燥引起晶体混浊，影响观察进针。
   
4. 抗生素眼药水术前滴眼。
   
5. 调整小鼠头位。此时小鼠头部与麻醉机的鼻椎相连，保持角膜缘水平位，充分暴露术野；若注射体积大于1uL，可提前在角膜缘做一个前房穿刺的隧道，轻压角膜，放出一部分房水，防止注射后眼压过高引起药物反流。
   
6. 注射位置选择：用镊子在上下眼睑之间滑动，将眼球从眼眶中轻轻挤出，暴露角膜缘后1mm位置，避开血管进针。
   
7. 注射：用Hamilton的33G做巩膜通道，针尖垂直从角膜缘后1mm位置进入，随后适当倾斜。（小鼠晶状体是球形，倾斜角度小会损伤晶体，角度过大会扎伤视网膜或扎到网膜上的血管导致出血）
   
8. 注射：平稳注入液体，注意注射过程避免晃动引起额外的组织损伤。推注完毕以后留针10s，迅速出针。术毕使用抗生素眼膏涂眼。
   
9. 将小鼠放在恒温复苏毯上等待麻醉清醒。

（二）结膜下注射

1. 小鼠麻醉及准备步骤同上。
   
2. 将眼膏涂在另一只不接受注射的眼睛上，以防止干燥和受伤。
   
3. 调整小鼠头位。此时小鼠头部与麻醉机的鼻椎相连，保持眼球水平位，充分暴露术野。
   
4. 将两个手指放在小鼠上下眼睑，轻轻拉开眼睑，露出结膜，左手用镊子夹住注射位置的结膜。
   
5. 松开眼皮，右手握住针头，斜面朝上。左手轻提注射位置结膜，插入针头，直到斜面完全被结膜覆盖。（可以很清楚的看到枕头位于结膜下）
   
6. 平稳推注，注射完成后，将针头固定10秒，然后抽出，减少药物反流的机会。（也可以退针后用镊子夹闭一会儿）
   
7. 术眼涂上抗生素眼膏，预防眼表干燥及感染，然后将小鼠放在恒温复苏毯上等待麻醉清醒。

五、注意事项

上述实验步骤已详述