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拟南芥茎端分生组织低熔点琼脂糖包埋

杨梦 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1047
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视频简介拟南芥材料切取 抽气,固定过夜 更换蔗糖溶液梯度 材料包埋
  • 视频介绍

一、视频摘要

 植物的茎端分生组织为地上部分器官和组织提供新细胞,因此,茎端分生组织发育调控对于植物的生长发育具有至关重要意义。



二、关键词

拟南芥茎端分生组织、低熔点琼脂糖、包埋


三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1.样品信息


2.试剂和耗材

4%的多聚甲醛(PFA)溶液、PBS溶液低熔点琼脂糖粉末

3.仪器和软件

金属浴


四、实验操作
1、材料包埋:提前将2的低熔点琼脂糖冷却至40-50℃(最后至于45℃水浴中保温备用)将琼脂糖至于小容器中,将材料从蔗糖溶液中取出,用吸水纸吸干水滴后将其埋入琼脂糖中,埋入若干后将小容器至于冰上,使琼脂糖快速凝固。将凝固的琼脂块用塑料袋装好,存于4℃准备切片(不可长期保存)。

(开50℃金属浴,先把材料转移到滤纸上,将材料吸干水全部放在胶上,再挨个排列。)

2、切片之前配置90% 1× PBS的封片剂,4℃保存。

3、用震荡切片机切片,样品切片厚度未40 μm。

①材料都放在冰上

②修块:切的面与底面平行

参数:

speed 1.2 11.0振幅:AMPL 1.2 10.8

AuTo FeeD:厚度

4、染色:需用FE58染色(工作液)

1)染色 常温30 min(避光)

2)洗脱1× PBS(蛋白用)洗3次 每次10 min(避光)

3)挑出来做片子 然后放在冰上

4)照相 程序用405激发光

染色可以暂时放4℃

5、展片

五、注意事项

注意取材、包埋材料的位置、处理镊子及针尖的凝胶

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