一、视频摘要
植物的茎端分生组织为地上部分器官和组织提供新细胞,因此,茎端分生组织发育调控对于植物的生长发育具有至关重要意义。
二、关键词
拟南芥茎端分生组织、低熔点琼脂糖、包埋
三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1.样品信息
2.试剂和耗材
4%的多聚甲醛(PFA)溶液、PBS溶液低熔点琼脂糖粉末
3.仪器和软件
金属浴
四、实验操作
1、材料包埋:提前将2的低熔点琼脂糖冷却至40-50℃(最后至于45℃水浴中保温备用)将琼脂糖至于小容器中,将材料从蔗糖溶液中取出,用吸水纸吸干水滴后将其埋入琼脂糖中,埋入若干后将小容器至于冰上,使琼脂糖快速凝固。将凝固的琼脂块用塑料袋装好,存于4℃准备切片(不可长期保存)。
(开50℃金属浴,先把材料转移到滤纸上,将材料吸干水全部放在胶上,再挨个排列。)
2、切片之前配置90% 1× PBS的封片剂,4℃保存。
3、用震荡切片机切片,样品切片厚度未40 μm。
①材料都放在冰上
②修块:切的面与底面平行
参数:
speed
1.2 11.0振幅:AMPL
1.2 10.8
AuTo
FeeD:厚度
4、染色:需用FE58染色(工作液)
1)染色
常温30 min(避光)
2)洗脱1× PBS(蛋白用)洗3次
每次10 min(避光)
3)挑出来做片子
然后放在冰上
4)照相
程序用405激发光
染色可以暂时放4℃
5、展片
五、注意事项
注意取材、包埋材料的位置、处理镊子及针尖的凝胶
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