一、视频摘要
质粒提取即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。
二、关键词
质粒提取,试剂盒提取,操作方法
三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1. 样品信息
带有需提质粒的LB培养基过夜培养后的大肠杆菌
2. 试剂和耗材
全式金质粒提取试剂盒
1ml加样枪,枪头
100ul加样枪,枪头
2
ml EP管
试管架
3. 仪器和软件
小型高速离心机
金属浴
四、实验操作
1. 取过夜培养的菌液1
ml,12000rpm,1min,弃上清。
2. 加入250ul
RB,震荡悬浮细菌沉淀,不留小块。
3. 加入250ul
LB(蓝色),温和地上下翻转,混合4-6次,充分裂解菌体,形成蓝色透亮的溶液,颜色由半透亮变为透亮蓝色,指示完全裂解。(不宜超过5min)
4. 加入350ul
NB(黄色),轻轻混合5-6次,颜色由蓝色完全变成黄色,指示混合均匀,中和完全,直至形成紧实的黄色凝集块,室温静置2min。
5.
12000rpm离心10min,吸取上清加入离心柱中。静置5min。12000rpm,1min,弃去流出液。
6. 加入650ul
WB,12000rpm,1min,弃去流出液。
7.
12000rpm离心2min,彻底去除残留的WB。
8. 将离心柱置于一干净的离心管中,晾干酒精10min,在柱中央加入50ul的EB(65℃预热),室温静置5min。
9.
12000rpm,1min,洗脱。
10. 流出液即为目的质粒。标记质粒名称,日期等留待后续实验。
五、注意事项
1.加入LB后,时间不超过5min
2.吸附柱应当晾干酒精,且注意不要戳破滤膜
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