一、视频摘要

本氏烟（Nicotiana benthamiana）是一个很好的植物生物反应器。它的植物瞬时表达系统是外源基因表达的一个高效途径^[1]。植物瞬时表达系统中外源基因的导入方法有植物病毒介导法、PEG法、电击法、基因枪法和农杆菌渗滤法^[2]。农杆菌渗滤法是一种比较简便的方法，通过将植物表达载体导入农杆菌，用真空法或接种法将农杆菌导入植物细胞，使得农杆菌Ti质粒上的 T-DNA 区整合到植物基因组中，T-DNA区的目标基因培养几天后即可得到表达。较其他方法而言，农杆菌渗透法具有转化效率高，其因表达在完整活体内进行，可携带较大片段的目的基因等优点。

二、关键词

本氏烟，农杆菌渗滤接种，外源基因，表达。

三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

2. 试剂和耗材

试剂：

100mL LB固体培养基

10mL LB液体培养基

抗生素

IM培养基

乙酰丁香酮

耗材：

一次性医用乳胶手套

培养皿

离心管

1mL 注射器

3. 仪器和软件

仪器

28℃恒温培养箱

高速离心机

Nanodrop8000高通量分光光度计

四、实验操作

1、倒平板 使用实验所用微波炉将100mL固体培养基完全溶解,加入相应抗生素各100µl,倒入培养皿，至其凝固。

2、划线培养 将所需的菌液划线至28℃培养倒置培养36-48小时。

3、摇菌 从28℃培养箱中取出长满菌的培养皿，挑取单克隆菌落，放入10mL所含相应抗生素的液体培养基中，培养16h左右。

4、诱导菌 将培养好的菌液倒入离心管，高速离心机3000g离心15分钟，倒掉上清，加入5ml IM培养基，放至4℃冰箱中诱导3h。

5、接种 将诱导好的菌液浓度调至OD=0.6，使用1ml注射器接种到本氏烟叶片中。

五、注意事项

1、诱导菌时，使用离心机一定注意对角线平衡，以免损坏离心机。

2、接种烟草时，从叶片的背面微刺，以免伤害烟草叶片。

六、结果分析（可选）

七、参考文献（可选）

[1]马洁雪,吴乐乐,丁向真,李志英,王盛.在烟草叶片中瞬时表达具有生物活性的重组人纤溶酶原激活剂[J].南方医科大学学报,2019,39(05):515-522.

[2]王臣臣,王丽华,刘言龙,纪康伟,申震,梁坤,詹秋文,李杰勤.提高作物转基因效率方法研究进展[J].分子植物育种,2019,17(11):3585-3592.DOI:10.13271/j.mpb.017.003585.