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BCA法测量蛋白质浓度

王泽夏, 陈煦蕊陈欣怡 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1085
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视频简介待测蛋白与BCA工作液发生特异性结合,在一定温度下作用一段时间后,通过使用酶标仪检测待测蛋白的吸光度,结合BSA绘制的标准曲线,从而测定出未知蛋白质含量。
  • 视频介绍

一、视频摘要

待测蛋白与BCA工作液发生特异性结合,在一定温度下作用一段时间后,通过使用酶标分析仪检测待测白蛋的吸光度,结合BSA绘制的标准曲线,从而测定出未知蛋白质含量。

二、关键词

BCA工作液、蛋白质标准曲线、酶标分析仪

三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息


2. 试剂和耗材

试剂:1.BCA工作液AB

2.BSA标准品溶液

3.待测蛋白样液

耗材:1000 μL枪头、20 μL枪头、96孔板、1.5 mL离心管、15 mL离心管

3. 仪器和软件

1.酶标分析仪

2.恒温振荡培养箱

3. 100-1000 μL移液枪

4. 2-20 μL移液枪

四、实验操作

1.根据样品数量,按50体积BCA试剂A1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,利用吹吸的方法将两种试剂混合均匀。

2.0.5 mg/mL标准品溶液按0248121620 μL加至96孔板中,加标准品稀释液(PBS)补充至20 μL,每组做两个复孔。

3.吸取20 μL体积待测蛋白溶液加至96孔板中,待测蛋白溶液做2-3个复孔。

4.每孔加入200 μL BCA工作液。

5.96孔板放置于37°C的恒温振荡培养箱中孵育30分钟,使其充分反应。

6.用酶标分析仪在562 nm波长处测定蛋白质的吸光度。

7.根据测得数据绘制蛋白质标准曲线。

8.根据蛋白质标准曲线和待测蛋白吸光度计算出样品浓度。

五、注意事项

1.实验时要佩戴手套。

2.每吸取一次液体更换一次枪头。

3.上样要保证无气泡。

六、结果分析(可选)

1、根据标准蛋白各浓度的吸光度绘制出标准曲线

2、根据标准蛋白各浓度的吸光度计算出标准曲线公式及R2

3、通过标准曲线公式及待测蛋白质吸光度计算出待测蛋白浓度

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