一、视频摘要
待测蛋白与BCA工作液发生特异性结合,在一定温度下作用一段时间后,通过使用酶标分析仪检测待测白蛋的吸光度,结合BSA绘制的标准曲线,从而测定出未知蛋白质含量。
二、关键词
BCA工作液、蛋白质标准曲线、酶标分析仪
三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1. 样品信息
2. 试剂和耗材
试剂:1.BCA工作液A、B液
2.BSA标准品溶液
3.待测蛋白样液
耗材:1000
μL枪头、20
μL枪头、96孔板、1.5
mL离心管、15
mL离心管
3. 仪器和软件
1.酶标分析仪
2.恒温振荡培养箱
3.
100-1000 μL移液枪
4.
2-20 μL移液枪
四、实验操作
1.根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,利用吹吸的方法将两种试剂混合均匀。
2.将0.5
mg/mL标准品溶液按0、2、4、8、12、16、20
μL加至96孔板中,加标准品稀释液(PBS)补充至20
μL,每组做两个复孔。
3.吸取20
μL体积待测蛋白溶液加至96孔板中,待测蛋白溶液做2-3个复孔。
4.每孔加入200
μL BCA工作液。
5.将96孔板放置于37°C的恒温振荡培养箱中孵育30分钟,使其充分反应。
6.用酶标分析仪在562
nm波长处测定蛋白质的吸光度。
7.根据测得数据绘制蛋白质标准曲线。
8.根据蛋白质标准曲线和待测蛋白吸光度计算出样品浓度。
五、注意事项
1.实验时要佩戴手套。
2.每吸取一次液体更换一次枪头。
3.上样要保证无气泡。
六、结果分析(可选)
1、根据标准蛋白各浓度的吸光度绘制出标准曲线
2、根据标准蛋白各浓度的吸光度计算出标准曲线公式及R2
3、通过标准曲线公式及待测蛋白质吸光度计算出待测蛋白浓度
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