一、视频摘要
Western
Blot目前已经走进绝大多数实验室，也称为蛋白质免疫印迹，在检测蛋白表达方面发挥着极其重要的作用。Western
Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳法，被检测的蛋白被对应的一抗体所识别，用标记的二抗进行孵育后，利用底物显色或者放射自显影显色。该视频只囊括了从煮样跑胶到一抗孵育相关步骤，由于每个人操作习惯的不同可能存在一定的差异，实验视频仅供参考。
二、关键词
Western
Blot、蛋白、聚丙烯酰胺凝胶电泳
三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器
1.样品信息
2.试剂、耗材和仪器
蛋白样品、蛋白Marker、电泳仪、电泳凝胶、无水甲醇、电泳液、转膜液、电泳槽、转膜槽、电泳仪、摇床、PVDF膜、脱脂奶粉、转膜夹子、海绵垫、滤纸。
四、实验操作
1.蛋白样品煮样后进行离心；
2.将胶板与电泳槽进行组装后加入合适的电泳液；
3.将蛋白样品上样并点上蛋白marker；
4.80
V恒压进行电泳，待蛋白样品进入分离胶后将电压调至120
V；
5.待蛋白样品分离至合适位置（参考蛋白Marker位置）进行转膜；
6.转膜操作参考视频转膜环节；
7.转膜按照250
mA恒流进行转膜，转膜时间根据蛋白进行确定；
8.转膜结束后用10%脱脂奶粉进行膜的封闭，室温封闭45
min；
9.封闭结束后用5%脱脂奶配制一抗，然后裁膜进行抗体孵育；
10.一抗孵育：室温1
h，四度过夜。
五、注意事项
1.电泳和转膜时切忌注意正负极；
2.转膜时对上样的第一个泳道做好标记；
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