一、视频摘要
本实验目的是为了检测样本中的CST4含量。实验利用酶联免疫法，采用抗-CST4单克隆抗体包被于微孔反应板上，加入待测标本孵育后，再加入辣根过氧化物酶标记的抗-CST4单克隆抗体。如果待测标本中含有CST4（抗原)，就能与包被的抗-CST4单抗结合，并且与辣根过氧化物酶标记的抗-CST4单克隆抗体（抗-CST4-HRP）结合形成复合物，加入TMB底物后产生显色反应。在一定范围内，吸光度OD值与标本中的CST4含量成线性关系。通过同步检测已知浓度的CST4校准品并计算标准曲线后，将待检标本OD值代入回归方程即可求出 CST4含量。
二、关键词
人半胱氨酸蛋白酶抑制剂S；CST4；酶联免疫；酶联免疫双抗体夹心法；
三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器
1. 样品信息
胃组织肿瘤患者、肠组织肿瘤患者血清样本
2. 试剂和耗材
人半胱氨酸蛋白酶抑制剂S（CST4）检测试剂盒
3. 仪器和软件
使用仪器为安图酶标仪PHOMO
3011002086
软件为
安图酶标2.0
四、实验操作
1、前期试剂准备：所有试剂和样本平衡至室温，大约需要30分钟。
1.1仪器准备：洗板机或洗瓶、37C恒温箱或水浴箱、微量移液器和振荡器。
1.2
TMB底物：分为A、B液两种，使用时，取实验需要量底物液按1:1混合，配
制混合完立即使用。
1.3洗涤液：用纯化水将洗涤浓缩液进行25倍稀释至工作浓度。
2.测定步骤
2.1校准品及样本加样：
将准备好的校准品（7个浓度）和质控品按照顺序加入微孔反应板中，为了保证实验的准确性，建议每个浓度校准品加两个孔，每孔加入 100L。校准品加好以后，样本按照顺序依次加入到微孔反应板中，每孔加入100μL。加完以后，用膜封闭微孔反应板，置于37℃环境孵育 1h。
2.2 洗板
如果手工洗板：甩净酶标板中的液体，洗涤液注满各孔，静置10秒，甩净孔里的液
体，在吸水纸上拍干，以上步骤反复进行5次；如果洗板机洗板，选择洗涤5次程序洗板
后拍干。
2.3酶标抗体
每孔加入100μL酶标抗体，37℃孵育1h。
2.4洗板（同2.2）
2.5显色
每孔加入100μL配制好的底物，37C避光孵育15min。
2.6 终止
每孔加入100μL终止液，15min内完成显色。
2.7 测定 OD值
用PHOMO酶标仪读数，测量波长450nm，读取各孔OD值。
五、注意事项
实验时室温高于30℃或低于 15℃，会使结果产生偏差。
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