一株耐盐碱芦苇内生贝莱斯芽孢杆菌除盐和除碱能力的测定

一、视频摘要

1.实验目的：检测内生贝莱斯芽孢杆菌在培养液中的除盐和除碱能力

2.实验原理：盐培养基中含有氯离子，向其中滴加铬酸钾溶液做为指示剂，用硝酸银标准溶液来滴定氯离子，由于氯化银的溶解度小于铬酸银的溶解度，故先生成乳白色的氯化银沉淀，当水中氯离子被滴定完毕后，稍过量的硝酸银即与铬酸钾生成稳定的橙黄色铬酸银沉淀，指示滴定终点；由于细菌发酵产酸是降低培养液pH的最重要的方式之一，因此，检测菌株的除碱能力时需要选择易产酸的培养基。

3.结论：该内生菌株的除盐率为4%，因此，确定几乎无除盐能力，其能在高盐度胁迫下正常生长的原因是具有对盐分的耐受能力；其除碱率为13.18%，说明该菌株具有一般程度的除碱能力。

二、关键词

芦苇；耐盐碱内生细菌；贝莱斯芽孢杆菌

三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

2. 试剂和耗材

试剂： 0.1 mol/L AgNO3溶液、质量分数为10%的铬酸钾溶液、LB肉汤培养基

耗材：移液器、三角瓶、EP管、试管架、移液管、洗耳球

3. 仪器和软件

梅特勒pH计、灭菌锅、摇床

四、实验操作

将待测菌株按 1%接种量接种于 pH 值为 8，盐度为 8%的LB固体培养基中，于28 ℃，150 r/min 震荡培养至48 h。

利用 AgNO₃溶液滴定法测定菌株除盐能力，取 2 mL 发酵液，滴加 1 滴质量分数为10%的铬酸钾溶液作为指示剂，用 0.1 mol/L AgNO₃溶液滴定。一边滴一边摇晃，直至三角瓶中出现的沉淀由乳白色变成橙黄色且颜色30 s不褪去即为滴定终点。记录AgNO₃溶液用量，并计算 Cl^-浓度 c(Cl^-)，每组 3 个平行。其计算公式为 c(Cl^-)=c(AgNO₃)×V₁/V₂，式中：V₁为滴定时消耗的 AgNO₃溶液的体积（mL）；V₂为滴定时取的发酵液的体积，即 2 mL。

菌株除盐效率 η₁=（c(Cl^-)max—c(Cl^-)min）/c(Cl^-)max×100%，式中：c(Cl^-)max为培养基中 Cl^-降解前浓度（mol/L）；c(Cl^-)min为培养基中 Cl-降解后浓度（mol/L）。 利用 pH 计测量发酵液前后 pH 值，并按以下公式计算除碱效率。 菌株除碱效率 η₂=（pH_初始-pH_终止）/pH_初始×100%，式中：pH_初始为接种前培养基酸碱度；pH_终止为反应终止菌株降解后培养基酸碱度。

五、注意事项

硝酸银是强氧化剂，具有一定的腐蚀性，会直接造成人体皮肤以及消化道黏膜的灼烧破损，严重的话会导致生命危险，注意保护皮肤，如果不慎接触皮肤，应及时用清水或肥皂水冲洗。