一、视频摘要
脉络膜血管系统的完整性对视力至关重要，脉络膜微血管组织参与了许多眼部疾病的过程，脉络膜血管生成异常与眼部疾病有关。脉络膜易从小鼠中分离，在培养过程中脉络膜迅速发育出芽，可定量测定，重复性高，是体外探究微血管生成的理想模型[1]。
二、关键词
脉络膜出芽、小鼠、眼球
三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器
1. 样品信息
C57BL/6J小鼠
2. 试剂和耗材
试剂：
1%戊巴比妥钠、75%乙醇、ECM完全培养基（1001,
ScienCell）、低生长因子基质胶（Corning）
耗材：
10cm细胞培养皿、24孔细胞培养板、眼科显微镊、眼科显微剪、1mL注射器针头、纱布
3. 仪器和软件
1.
OLYMPUS SZ61显微镜
2.
imageview显微镜摄像软件
3.
ImageJ图像分析软件
四、实验操作
1. 将基质胶提前放入4°冰箱，过夜解冻，同时提前预冷移液枪枪头和24孔细胞培养板。
2. 小鼠麻醉后颈椎脱位安乐死，用镊子分离出眼球，置于冰上盛满培养基的细胞培养大皿中待解剖。
3.
75%乙醇擦拭显微镜台。
4. 从眼球前部移除角膜和晶状体后，用镊子剥离视网膜，将脉络膜-巩膜复合体沿圆周分离出宽约1mm的条带，再剪成1mm×1mm的小片。将脉络膜小片放置在播种好基质胶的24孔板中（不区分正反面），放入37℃细胞培养箱中待基质胶凝固后取出。
5. 每孔加入500μL完全培养基。在37℃、5%二氧化碳的细胞培养箱中孵育，每48小时更换培养基。第四、五、六天观察并拍照记录。用计算机软件ImageJ对发芽面积进行量化。
五、注意事项
1. 注意充分预冷移液枪枪头和24孔细胞培养板，以免基质胶过早凝固。
2. 注意待播种好脉络膜植片的基质胶完全凝固后再加入培养基。
六、结果分析（可选）
七、参考文献（可选）
-
Shao Z, Friedlander
M, Hurst CG, et al. Choroid sprouting assay: an ex vivo model of
microvascular angiogenesis. PLoS One 2013;8:e69552.
-
Tomita Y, Shao Z,
Cakir B, Kotoda Y, Fu Z, Smith LEH. An Ex Vivo Choroid Sprouting
Assay of Ocular Microvascular Angiogenesis. J Vis Exp 2020.
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