首页     短视频

眼微血管生成的体外脉络膜发芽试验

唐韵 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1093
观看次数: 38 次  复制链接
视频简介分享眼微血管生成的体外脉络膜发芽试验的操作步骤
  • 视频介绍

一、视频摘要

脉络膜血管系统的完整性对视力至关重要,脉络膜微血管组织参与了许多眼部疾病的过程,脉络膜血管生成异常与眼部疾病有关。脉络膜易从小鼠中分离,在培养过程中脉络膜迅速发育出芽,可定量测定,重复性高,是体外探究微血管生成的理想模型[1]

二、关键词

脉络膜出芽、小鼠、眼球

三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

C57BL/6J小鼠


2. 试剂和耗材

试剂:

1%戊巴比妥钠、75%乙醇、ECM完全培养基(1001, ScienCell)、低生长因子基质胶(Corning

耗材:

10cm细胞培养皿、24孔细胞培养板、眼科显微镊、眼科显微剪、1mL注射器针头、纱布


3. 仪器和软件

1. OLYMPUS SZ61显微镜

2. imageview显微镜摄像软件

3. ImageJ图像分析软件

四、实验操作

1. 将基质胶提前放入冰箱,过夜解冻,同时提前预冷移液枪枪头和24孔细胞培养板。

2. 小鼠麻醉后颈椎脱位安乐死,用镊子分离出眼球,置于冰上盛满培养基的细胞培养大皿中待解剖。

3. 75%乙醇擦拭显微镜台。

4. 从眼球前部移除角膜和晶状体后,用镊子剥离视网膜,将脉络膜-巩膜复合体沿圆周分离出宽约1mm的条带,再剪成1mm×1mm的小片。将脉络膜小片放置在播种好基质胶的24孔板中(不区分正反面),放入37℃细胞培养箱中待基质胶凝固后取出。

5. 每孔加入500μL完全培养基。在37℃5%二氧化碳的细胞培养箱中孵育,每48小时更换培养基。第四、五、六天观察并拍照记录。用计算机软件ImageJ对发芽面积进行量化。


五、注意事项

1. 注意充分预冷移液枪枪头和24孔细胞培养板,以免基质胶过早凝固。

2. 注意待播种好脉络膜植片的基质胶完全凝固后再加入培养基。


六、结果分析(可选)



七、参考文献(可选)

  1. Shao Z, Friedlander M, Hurst CG, et al. Choroid sprouting assay: an ex vivo model of microvascular angiogenesis. PLoS One 2013;8:e69552.

  2. Tomita Y, Shao Z, Cakir B, Kotoda Y, Fu Z, Smith LEH. An Ex Vivo Choroid Sprouting Assay of Ocular Microvascular Angiogenesis. J Vis Exp 2020.

声明:该视频作品仅代表作者观点,用于共享科学技术。内容仅供大家参考,不代表本站立场。