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小鼠心脏灌流及取脑组织步骤

钟光钧 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1094
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视频简介1、小鼠麻醉后立即将其用针头固定在泡沫板上(用针头插住四股)。用镊子扯起胸部皮肤,另一只手用剪刀剪开胸腔的皮肤和肋骨,暴露出心脏和肝脏。 2.将注射针头插入小鼠左心室,剪开右心耳,以使血液流出。灌注生理盐水,时间维持在1min左右,血液排出后四肢、肝脏和舌头会变白。 3.用 20ml4%PFA流固定,当 PFA流至大脑处可能会使小鼠尾巴略有反射现象。(固定原理:多聚甲醛可以使蛋白质交联) 4、将导管始端从PFA 中拿出,待管中液体流尽后,将心脏上的针头拔下。将托盘中的血液倒至废液桶内,并准备下一步的取脑操作。 取脑 1. 剪开头部皮肤,露出白色头盖骨。将延髓上包被的软骨剪开,除去多余的结缔组织。不能够直接扯下,因为眼睛后部连着视神经,如果扯的话有可能会损坏视交叉上核等其他脑部组织。 2. 将头盖骨小心剥开,露出白色的脑部,在剥嗅球部位时要格外小心,必要的话可以先将嗅球前部的碎骨留着待进一步固定之后再去除。 3. 将头盖骨剥开后,将脑下部连接的神经逐条剪短(可看到视神经交叉),待全部剪断后将脑整个剥离出来 4. 将剥离出来的脑浸泡在4%PFA中固定。
  • 视频介绍

一、视频摘要
啮齿动物固定的目的是为了快速且均匀地将组织保持于特定的生存状态。虽然将组织直接放置在固定液中可以很好地用于小块组织的固定。但是像完整大脑,心脏这样的较大样本会引起浸入式固定的问题,因为固定液并不会以相同的速率到达组织的所有区域,而组织往往在固定液进入前即发生缺氧反应。利用循环系统直接灌注固定液的优点是化学物质可以使用天然的血管网络系统快速到达生物体的各个角落以达到整体固定的效果。一种低成本,快速,可控和统一的固定方法,使用
4%多聚甲醛通过血管系统灌注以获得小鼠大脑最好的固定。


二、关键词

小鼠;取脑;心脏灌流;脑组织固定


三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

生理盐水

4%多聚甲醛

戊巴比妥

2. 试剂和耗材

1ml注射器

10ml注射器

26G针头

止血钳

镊子

剪刀

导管

3. 仪器和软件

四、实验操作

1、小鼠麻醉后用针头固定在泡沫板上(用针头插住四股)。用镊子扯起胸部皮肤,另一只手用剪刀剪开胸腔的皮肤和肋骨,暴露出心脏和肝脏。

2.将注射针头插入小鼠左心室,剪开右心耳,以使血液流出。灌注生理盐水,时间维持在1min10~20ml)灌注液左右,血液排出后四肢、肝脏和舌头会变白。

3.待小鼠四肢、肝脏和舌头变白之后,用 4%PFA流固定,当 PFA流至大脑处可能会使小鼠尾巴略有反射现象。(固定原理:多聚甲醛可以使蛋白质交联)

4、将导管始端从PFA 中拿出,待管中液体流尽后,将心脏上的针头拔下。将托盘中的血液倒至废液桶内,并淮备下一步的取脑操作。


取脑及脱水:

1. 剪开头部皮肤,露出白色头盖骨。将延髓上包被的软骨剪开,除去多余的结缔组织。不能够直接扯下,因为眼睛后部连着视神经,如果扯的话有可能会损坏视交叉上核等其他脑部组织。

2. 将头盖骨小心剥开,露出白色的脑部,在剥嗅球部位时要格外小心,必要的话可以先将嗅球前部的碎骨留着待进一步固定之后再去除。

3. 将头盖骨剥开后,将脑下部连接的神经逐条剪短(可看到视神经交叉),待全部剪断后将脑整个剥离出来。

5. 将剥离出来的脑浸泡在 4%PFA中,过夜固定。


五、注意事项

1. 针头大小与动物的种类有关,同时针头一定要磨钝。
2.
检查导管内是否堵塞,一定排出管子的气泡和空气,防止空气栓塞。
3.
经腹腔暴露胸腔,先清楚升主动脉外面的脂肪组织和心外膜组织。
4.
将针头经左心室插入升主动脉(颜色略浅),并用止血钳固定。
5.
剪开右心耳,同时注意,不要剪开心脏的其他部位,否则有时候可能会灌注成功但是绝大部分会造成灌注不成功,尤其肺水肿。

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