植物RNA的提取

一、视频摘要

植物RNA的提取是研究植物分子生理功能中常用的分子生物学实验。RNA是植物分子生物学研究的重要对象之一，从植物中获得高质量的RNA是后续RT-PCR、Northern 杂交、cDNA文库构建等分子生物学研究的基础。TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶，并且在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，具有效果稳定，操作简单、方便、快捷等优点。因此，本视频基于前辈们的研究，以烟草为研究对象，采取Trizol法提取叶片总RNA，详细讲解该方法的操作流程。

二、关键词

RNA的提取、叶片RNA 、Trizol、分子生物学

三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

烟草，第10 d叶片，26℃，16h光照，8h黑暗

2. 试剂和耗材

试剂：

1. 三氯甲烷

2.异丙醇

3.75%乙醇

4.无菌无酶水

5.Trizol试剂（裂解液）

耗材：

1.液氮

2.枪头

3.1.5ml离心管

4.锡箔纸

5.冰盒

3. 仪器和软件

1.4℃离心机

2.超净工作台

3.移液枪

4.坩埚

四、实验操作

1.取样：将叶片取下，使用锡箔纸包裹好置于液氮中速冻，并使用液氮处理坩埚，为坩埚降温。

2. 研磨并加入裂解液：将烟草叶片放入液氮处理的研钵中，加入液氮并捣碎叶片，快速研磨，过程不断加入液氮并研磨至抹茶状。将粉末装进离心管中，没过管底即可。加样完毕后迅速置于冰上，并向离心管中加入1 ml裂解液。

3.剧烈震荡后静置：使用涡旋振荡器将离心管中液体充分震荡均匀，室温静置5 min。

4.加入三氯甲烷后离心：向离心管中加入200ul三氯甲烷，剧烈震荡充分混匀样品，冰上静置5min，并使用4℃离心机12000 rpm离心15 min。

5，加入异丙醇后离心：小心吸取550 ul上一步中的上清液于新的离心管中，向离心管中加入550 ul（等体积）的异丙醇，冰上静置10 min。 后使用4℃离心机12000 rpm离心10 min并弃上清，留下含有RNA的沉淀。

6.加入75%乙醇洗涤：吸取1 ml 75%乙醇于离心管中，对沉淀进行洗涤后离心，12000 rpm离心5 min。离心后弃上清，或用移液枪小心将上清吸干，将离心管置于灭好菌的超净工作台中进行风干。

7.加水溶解：向风干后的离心管中加入无菌无酶水将沉淀溶解。可使用移液枪吹打，加速溶解。溶解后RNA提取完毕。

五、注意事项

1. 离心管、枪头在研磨加样时需进行液氮降温处理。

2. 裂解液需在冰上使用，用毕盖好盖子4℃保存好。

3.三氯甲烷见光易分解产生有毒气体，需要在通风良好的环境或通风橱中进行，避免对人体的伤害。

4.加入异丙醇后可于-80℃中过夜，否则置于冰上10 min用于后续操作。

5. 风干时间无需太久，5-10 min即可，太干影响后续溶解。

6.实验全程需佩戴手套、口罩。

六、结果分析（可选）

提取的RNA可以通过核酸浓度测量仪器进行浓度测量，以检测其结果。

七、参考文献（可选）

[1]王燕华,林明,何水林,陈桂信,郭丽红.辣椒叶片RNA提取方法研究[J].福建农业大学学报,2004(03):336-338.

[2]杜希华,陆海,高述民,李凤兰.文冠果花药总RNA提取方法研究[J].北京林业大学学报,2003(01):10-13.

[3]牛西强,罗潇云,胡能兵,黄先忠.辣椒组织总RNA两种提取方法比较及qRT-PCR验证[J].安徽科技学院学报,2021,35(06):42-47.

[4]王林,王晓敏,李霞,郭荔雯,孔维康,潘兵青.茴香叶片总RNA提取方法的比较[J].黑龙江农业科学,2021(08):48-51.