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靶向小鼠肝脏细胞递送质粒系统

义玉国 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1099
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视频简介在小鼠体内高效的递送质粒来表达目的基因对于在体研究基因的功能与疾病的关联具有重要的科学意义。而目前大多采用AAV病毒来递送质粒,具有较好的效果,但是AAV病毒的包装和纯化技术门槛较高,且时间长成本高,更重要的是AAV病毒只能递送小片段的DNA序列,不能超过4.5Kb,对于较大的载体无能为力。本视频基于前人的研究,采用小鼠流体动力学注射的方法可以将大片段的质粒DNA溶液经小鼠尾静脉快速注射入小鼠体内,并能够在小鼠肝脏中高度表达,为肝癌模型的构建提供了很好的技术手段。
  • 视频介绍

一、视频摘要

在小鼠体内高效的递送质粒来表达目的基因对于在体研究基因的功能与疾病的关联具有重要的科学意义。而目前大多采用AAV病毒来递送质粒,具有较好的效果,但是AAV病毒的包装和纯化技术门槛较高,且时间长成本高,更重要的是AAV病毒只能递送小片段的DNA序列,不能超过4.5Kb,对于较大的载体无能为力。本视频基于前人的研究,采用小鼠流体动力学注射的方法可以将大片段的质粒DNA溶液经小鼠尾静脉快速注射入小鼠体内,并能够在小鼠肝脏中高度表达,为肝癌模型的构建提供了很好的技术手段。

二、关键词

尾静脉, 高压注射, 递送质粒, 肝癌


三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

六周大的Balb/c小鼠


2. 试剂和耗材

试剂:

4%多聚甲醛溶液;

赛拉嗪;

氯胺酮;

Tissue-Tek SAKURA OCT包埋剂(货号:4583)

耗材:

1ml, 5 ml注射器;

27G针头;

小鼠固定器


3. 仪器和软件

冷冻切片机(LeicaCM1950

Nikon ECLIPSE Ti2荧光显微镜

干式恒温器(GL-150B

水浴锅

四、实验操作

1. 注射前:将要注射的质粒溶液进行37度水浴加热,并在37度烘箱中加热小鼠垫料,保证注射后小鼠能在37度的环境中进行恢复。

2. 注射:选取六周大的小鼠,记录小鼠体重,按照10%体重的量来注射质粒溶液,每只小鼠大约注射50ug的质粒,尾静脉注射应全程在5-8s内完成。

3. 注射后:用棉球按压止血后,迅速将小鼠放置到加热好的垫料中恢复。一天后即可检测质粒的表达情况。


五、注意事项

1. 一定要预先加热质粒溶液和小鼠垫料,可以极大提高小鼠的成活率。

2. 注射一定要快速,必须在5-8s内完成。


六、结果分析(可选)

1. 注射完成8小时即可检测到质粒的表达情况。


七、参考文献(可选)

1. Liu F, Song Y, Liu D. Hydrodynamics-based transfection in animals by systemic administration of plasmid DNA. Gene Ther. 1999 Jul;6(7):1258-66.

2. Tang M, at al. Liver cancer heterogeneity modeled by in situ genome editing of hepatocytes. Sci Adv. 2022 Jun 24;8(25):eabn5683.


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