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拟南芥种子OCT冷冻包埋技术

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视频简介对于植物疏松且较小,不便于常规操作的组织,例如拟南芥种子进行OCT冷冻包埋的技术方案。
  • 视频介绍

一、视频摘要

空间转录组是测量完整组织切片的总mRNA,将总mRNA的空间信息与形态学内容相结合,并绘制所有基因表达发生的位置,获得生物过程复杂而完整的基因表达图谱。对于细胞生命活动的调控机制和细胞谱系发生过程的研究具有重要意义。模式植物拟南芥在植物生殖发育过程等领域做出了重要贡献。本实验目的在以拟南芥材料为基础,建立一种用于空间转录组学分析的样本处理方案。

二、关键词

拟南芥,种子,OCT,包埋,冷冻


三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息


2. 试剂和耗材

无水乙醇,乙酸,OCTNF-water,包埋盒,滤纸,液氮,离心管


3. 仪器和软件

冰箱,真空泵,离心机


四、实验操作

1.收样后的种子置入卡诺固定液(V乙醇V冰醋酸=3:1,4℃过夜固定。

2.吸弃固定液,用无菌吸水纸吸干种子表面的固定液并吹干。

3.将种子转移至1.5mL离心管,并加入适量的50%OCT轻轻混匀,然后将样品置于冰上抽真空10min

4.将样品移入4℃置换4h。取出样品瞬时离心,然后冰上操作在超净台中吸弃50% OCT

5. 加入适量的OCT溶液并将种子和OCT混匀,然后瞬时离心,在超净台中冰上操作吸弃OCT溶液,再重复步骤9一次。

6.冰上操作,再向离心管中添加适量的新的OCT,瞬时离心,准备包埋。

7.包埋时可以先在包埋盒底部薄薄铺一层OCT并冷冻凝固,然后冰上进行,用枪头吸取上述适量种子缓慢铺于凝固的OCT表面,围绕种子添加一圈OCT进行覆盖种子,然后快速移至液氮表面进行冷冻凝固。

8.包埋后的样品储存在-80℃,进行冷冻切片和时空组学实验。

五、注意事项

1.实验操作尽可能在4度环境下进行

2.包埋样品时避免包埋块直接接触液氮

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