一、视频摘要
乙酰胆碱酶属于丝氨酸水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。乙酰胆碱酯酶参与细胞的发育和成熟,能促进神经元发育和神经再生,并且催化乙酰胆碱水解,在神经传导调节中起重要作用。乙酰胆碱酶催化乙酰胆碱水解生成胆碱,胆碱与二硫对硝基苯甲酸作用生成 5-巯基-硝基苯甲酸;5-巯基-硝基苯甲酸在 412nm 处有吸收峰,通过测定 412nm 吸光度增加速率,计算乙酰胆碱酶活性。
二、关键词
乙酰胆碱酶;动物组织;酶活
三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1. 样品信息
动物组织
2. 试剂和耗材
移液枪,离心管,乙酰胆碱酯酶试剂盒,移液枪吸头等
3. 仪器和软件
水浴锅,离心机,酶标仪
四、实验操作
1组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进
行冰浴匀浆,8000g
4℃离心 10min,取上清液待测。
2酶标仪预热30min以上,调节波长至412nm
3实验过程
试剂名称(μL)
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测定管
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对照管
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样本
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15
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15
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试剂二
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50
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-
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-
37℃ 水浴准确反应5min。
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试剂四
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50
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50
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试剂二
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-
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50
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混匀后12000rpm常温离心5min。分别吸取10μL上清液于新的EP管或96孔板中,之后分别加入
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试剂一
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170
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170
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试剂三
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20
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20
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混匀,放置2min后于微量玻璃比色皿中或96孔板中测定412nm处的吸光度,记为A测定管,A对
照管,计算ΔA=A测定管-A对照管。
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五、注意事项
酶标仪需预热30min以上
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