农杆菌的转化

一、视频摘要

农杆菌转化过程的利用是我们生物学实验中重要的实验方法，通过农杆菌转化法可以侵染花序，实现基因的转移；还可以注射烟草，实现对基因的亚细胞定位。做好农杆菌的转化是实现这一实验步骤的关键。本视频中对农杆菌转化过程进行了全面的讲解，相信同学们可以从中学习到新的知识。

二、关键词

农杆菌；侵染花序；亚细胞定位

三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

基因连接表达载体的质粒

2. 试剂和耗材

农杆菌感受态细胞，液氮，LB液体培养基，抗生素，LB固体培养基，封口膜

3. 仪器和软件

超低温冰箱，摇床，超净工作台

四、实验操作

1. 从超低温冰箱中取出感受态细胞

2. 冰浴融化后加入2ul质粒，吸打混匀

3. 将混匀的混合溶液冰上放置5分钟

4. 液氮中速冻1分钟

5. 37℃热击5分钟

6. 冰浴2分钟

7. 在超净工作台内加入600ul无抗性的液体LB培养基，放入摇床中振荡1-2小时取出

8. 10000rpm/min 离心5分钟

9. 倒掉上清，留下底部100ul左右的液体重悬沉淀

10. 将重悬菌液均匀的涂布在含抗性的固体LB培养基上，用封口膜密封

11. 将培养板放在28℃培养箱中倒置培养至长出单菌落即为转化成功。

五、注意事项

实验过程中注意避免污染。

六、结果分析（可选）

长出单个菌落即为转化成功。

七、参考文献（可选）

1. Atkinson N. J.; Lilley C.J.; Urwin P.E. Identification of genes involved in the response of Arabidopsis to simultaneous biotic and abiotic stresses. Plant Physiol. 2013, 162, 2028-2041

 2. Boutrot F.; Chantret N.; Gautier M.F. Genome-wide analysis of the rice and Arabidopsis non-specific lipid transfer protein (nsLtp) gene families and identification of wheat nsLtp genes by EST data mining. BMC Genomics 2008, 9, 86

3. Boyer J.S. Plant productivity and environment. Science 1982, 218, 443-448