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4%-20%蛋白电泳梯度胶的快速配制

王濛 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1117
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视频简介快速配制12块4%-20%蛋白电泳梯度胶
  • 视频介绍

一、视频摘要

蛋白电泳是在生物研究中非常常用的实验。与普通胶相比,梯度胶可以同时分离较大范围分子量的蛋白质。本实验可以一次性快速配制12块蛋白梯度胶,高效满足实验需求。


二、关键词

4%-20%蛋白梯度胶;梯度胶的配制;蛋白电泳


三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息



2. 试剂和耗材

试剂:

  1. 双蒸水

  2. TEMED(Sigma)

  3. APS(过硫酸铵, Sigma)

  4. 30%聚丙烯酰胺(兰博立德)

  5. 1.5M Tris-HclpH 8.8

耗材:

  1. 10 ml/25 ml 一次性移液管

  2. 1ml/200ul 一次性枪头


2.实验设备

  1. 龙方梯度胶生成仪

  2. 龙方多板制胶器

  3. 磁力搅拌器

  4. 电动大容量移液器

  5. 1ml/200ul 移液枪

  6. 洁净烧杯(250ml

  7. 蛋白胶电泳玻璃板(12套)

  8. 蛋白胶电泳梳子(12


3. 仪器和软件



四、实验操作

1.清洗配制蛋白胶的玻璃板和梳子:首先对胶板用单蒸水进行清洗,喷洒无水乙醇后,放入60度烘箱进行烘干,烘干后晾至室温。

2.组装多板凝胶灌制装置: 将洗净的12套胶板依次组装好。

3.检查漏液:将组装好的多板制胶器底部装上阀门,然后关闭,放入单蒸水中,水面没过阀门,如没有水进入多板制胶器,表明不会漏液,可进行下一步操作,同时用纸擦干制胶器表面的水。

4. 丙烯酰胺轻溶液和重溶液的配制和灌制:


(4%)

(20%)

双蒸水

36.7 mL

5 mL

30%聚丙烯酰胺

8 mL

40 mL

1.5M Tris-Hcl (pH 8.8)

15 mL

15 mL

10% APS

500 uL

500 uL

TEMED

40 uL

40 uL

按上表分别在洁净烧杯中配好轻溶液和重溶液。先关闭连通器的阀门和输出阀的阀门,将轻溶液和重溶液分别倒入连通器中,轻溶液倒在靠近输出的一侧(内有磁力转子),重溶液倒在另一侧。打开磁力搅拌器,先将输出阀打开,排气后,插入制胶器中,然后打开连通阀,液体开始流入制胶器中。待制胶器液体溢出后,关闭输出阀。迅速取下连通器,用单蒸水冲洗,以免凝胶堵塞连通器。然后将梳子插入制胶器中,室温静置1h

5.蛋白胶的拆取和储存:蛋白胶凝固后,将制胶器拆开,然后清理胶板表面的残胶,对每块胶用擦手纸进行包裹,然后浸满水。整理好12块胶放入自封袋中,自封袋中装入少量水,然后放入4度冰箱保存。


五、注意事项

制胶器需放在灌入胶液后,凝固前切勿移动。

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