4%-20%蛋白电泳梯度胶的快速配制

一、视频摘要

蛋白电泳是在生物研究中非常常用的实验。与普通胶相比，梯度胶可以同时分离较大范围分子量的蛋白质。本实验可以一次性快速配制12块蛋白梯度胶，高效满足实验需求。

二、关键词

4%-20%蛋白梯度胶；梯度胶的配制；蛋白电泳

三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

2. 试剂和耗材

试剂：

1. 双蒸水

2. TEMED(Sigma)

3. APS(过硫酸铵, Sigma)

4. 30%聚丙烯酰胺(兰博立德)

5. 1.5M Tris-Hcl（pH 8.8）

耗材：

1. 10 ml/25 ml 一次性移液管

2. 1ml/200ul 一次性枪头

2.实验设备

1. 龙方梯度胶生成仪

2. 龙方多板制胶器

3. 磁力搅拌器

4. 电动大容量移液器

5. 1ml/200ul 移液枪

6. 洁净烧杯（250ml）

7. 蛋白胶电泳玻璃板（12套）

8. 蛋白胶电泳梳子（12）

3. 仪器和软件

四、实验操作

1.清洗配制蛋白胶的玻璃板和梳子：首先对胶板用单蒸水进行清洗，喷洒无水乙醇后，放入60度烘箱进行烘干，烘干后晾至室温。

2.组装多板凝胶灌制装置: 将洗净的12套胶板依次组装好。

3.检查漏液：将组装好的多板制胶器底部装上阀门，然后关闭，放入单蒸水中，水面没过阀门，如没有水进入多板制胶器，表明不会漏液，可进行下一步操作，同时用纸擦干制胶器表面的水。

4. 丙烯酰胺轻溶液和重溶液的配制和灌制：

按上表分别在洁净烧杯中配好轻溶液和重溶液。先关闭连通器的阀门和输出阀的阀门，将轻溶液和重溶液分别倒入连通器中，轻溶液倒在靠近输出的一侧（内有磁力转子），重溶液倒在另一侧。打开磁力搅拌器，先将输出阀打开，排气后，插入制胶器中，然后打开连通阀，液体开始流入制胶器中。待制胶器液体溢出后，关闭输出阀。迅速取下连通器，用单蒸水冲洗，以免凝胶堵塞连通器。然后将梳子插入制胶器中，室温静置1h。

5.蛋白胶的拆取和储存：蛋白胶凝固后，将制胶器拆开，然后清理胶板表面的残胶，对每块胶用擦手纸进行包裹，然后浸满水。整理好12块胶放入自封袋中，自封袋中装入少量水，然后放入4度冰箱保存。

五、注意事项

制胶器需放在灌入胶液后，凝固前切勿移动。