BCA蛋白浓度测定

一、视频摘要
BCA蛋白浓度检测是一个实验，是根据吸光值可以推算出蛋白浓度.碱性条件下，蛋白将Cu²⁺还原为Cu⁺， Cu⁺与BCA试剂形成紫颜色的络合物，两分子BCA螯合一个Cu⁺。将该水溶性复合物在562nm处的吸收值，与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。

二、关键词

BCA；蛋白浓度；吸光值

三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

2. 试剂和耗材

1.5mL EP管；96孔板；博士德BCA蛋白浓度检测试剂盒

3. 仪器和软件

eppendorf离心机；EYELA恒温箱；Molecular Devices酶标仪

四、实验操作

1.将待测样品离心，取上清备用。

2.根据BCA蛋白浓度检测试剂盒说明书提前配置好所需BSA标准品，并配置好BCA工作液。

3.各取25μl标准品和待测样品（PBS稀释）加入到微孔板中。

4.每孔加入 200μl BCA 工作液，振荡 30s 充分混匀。盖上微孔板，37℃孵育 30min。

5.冷却到室温，在酶标仪上的 562nm 波长范围处检测吸光度。

五、注意事项

1.每次测量蛋白浓度均应做标准曲线。

2.需准备37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为 540-595nm 之间，562nm 最佳。酶标仪需与96孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

3.使用 BCA 蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，因此需注意保持定时和定温，以确保精确定量。

4.实验操作规范，提高上样量的精确度