首页     短视频

BCA蛋白浓度测定

任宇倩 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1132
观看次数: 18 次  复制链接
视频简介BCA蛋白浓度检测是一个根据吸光值推算出蛋白浓度的实验。碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,两分子BCA螯合一个Cu+。将该水溶性复合物在562nm处的吸收值,与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。本视频将告诉大家一些实验中的注意事项!
  • 视频介绍

一、视频摘要
BCA蛋白浓度检测是一个实验,是根据吸光值可以推算出蛋白浓度.碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+Cu+BCA试剂形成紫颜色的络合物,两分子BCA螯合一个Cu+。将该水溶性复合物在562nm处的吸收值,与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。

二、关键词

BCA蛋白浓度吸光值

三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

2. 试剂和耗材

1.5mL EP管;96孔板;博士德BCA蛋白浓度检测试剂盒

3. 仪器和软件

eppendorf离心机;EYELA恒温箱;Molecular Devices酶标仪

四、实验操作

1.将待测样品离心,取上清备用。

2.根据BCA蛋白浓度检测试剂盒说明书提前配置好所需BSA标准品,并配置好BCA工作液。

3.各取25μl标准品和待测样品PBS稀释加入到微孔板中。

4.每孔加入 200μl BCA 工作液,振荡 30s 充分混匀。盖上微孔板,37℃孵育 30min

5.冷却到室温,在酶标仪上的 562nm 波长范围处检测吸光度

五、注意事项

1.每次测量蛋白浓度均应做标准曲线。

2.需准备37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计,测定波长为 540-595nm 之间,562nm 最佳。酶标仪需与96孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时,试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时,应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

3.使用 BCA 蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关,因此需注意保持定时和定温,以确保精确定量。

4.实验操作规范,提高上样量的精确度

声明:该视频作品仅代表作者观点,用于共享科学技术。内容仅供大家参考,不代表本站立场。