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SDS-PAGE凝胶的配制

包富鹏, 肖宇彬李顺媚 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1134
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视频简介聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带。聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺和交联剂N,N’一亚甲基双丙烯酰胺在催化剂过硫酸铵(AP),四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶,并以此为支持物进行电泳。
  • 视频介绍

一、视频摘要:

蛋白质作为生物机体的主要活动的承担者,其体外表达与纯化在研究相应基因的功能上具有重要意义。而SDS-PAGE电泳加入离子去污剂和强还原剂后,蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小,电荷因素可以忽视。聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带,如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质,蛋白质样品电泳后,就应只分离出一条区带。一般在体外诱导或者纯化蛋白后,可通过SDS-PAGE电泳检测目的蛋白是否诱导或者纯化成功。本视频详细介绍了SDS-PAGE凝胶电泳配制的操作步骤及注意事项,可帮助蛋白新手快速上手。


二、关键词

蛋白质 SDS-PAGE电泳


三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

试剂和耗材:

H2O30% Acrylamide1M Tris-HCLPH 8.8)、10% SDS10% APTEMED、无水乙醇


四、实验操作

选用ATTO板,配置蛋白胶:

1)配制10% 蛋白分离胶(15 ml

H2O 5.9 ml

30% Acrylamide 5 ml

1M Tris-HCLPH 8.83.8 ml

10% SDS 0.15 ml

10% AP 0.15 ml

TEMED 0.006 ml

加至板的五分之四处,然后加无水乙醇封边,30min后,倒掉酒精。


2)配制5% 蛋白浓缩胶(5 ml

H2O 5 ml

30% Acrylamide 0.83 ml

1M Tris-HCLPH 8.80.63 ml

10% SDS 0.05 ml

10% AP 0.05 ml

TEMED 0.005 ml


3)插入白色梳子,30 min后,将夹子和胶条取下,用保鲜膜把板包好,置于4 ℃冰箱保存。


五、注意事项

1、凝胶制备时:TEMEDAP要后加,加入后用移液枪缓慢匀速混匀,避免有气泡产生;然后马上注入电泳槽内,插入梳子,这时也要匀速,太慢底部的胶会比上面的胶凝的快,影响胶的质量,同时小心有气泡;

2、由于与凝胶聚合有关的硅橡胶称、玻璃板表面不光滑洁净,在电泳时会造成凝胶板与玻璃板或硅橡胶条剥离,产生气泡或滑胶;剥胶时凝胶板易断裂,为防止引现象,所用器材均应严格地清洗。



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