一、视频摘要
大鼠肝S9生物学活性鉴定作为Ames试验体系中重要的商品化试剂质控内容，主要包括大鼠肝S9无菌测试，10% S9混合液生物学活性验证测试 。S9混合液活性的鉴定结果符合标准要求才能确保Ames试验活化代谢体系的有效性。
二、关键词
Ames试验、S9混合液、生物学活性、 代谢活化体系
三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器
1. 样品信息
大鼠肝S9 来源：MOLECULAR TOXICOLOGY, INC
2. 试剂和耗材
试剂：
1. 鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium) TA100，来源：MOLECULAR TOXICOLOGY, INC.；
2. 苯并（a）芘（BaP, 0.1mg/mL）来源：MOLECULAR TOXICOLOGY, INC.；
3. 2-氨基蒽（2-AA, 0.1mg/mL）来源：MOLECULAR TOXICOLOGY, INC.；
4. 磷酸盐缓冲液（0.2mol/L），KCl（1.65mol/L），MgCl2·6H2O（0.4mol/L），D-葡萄糖6-磷酸二钠盐（0.05mol/L），NADP（0.025mol/L）；
5. 营养肉汤
耗材：
1. 10mL离心管；
2. 200uL,1000uL吸头及吸液枪；
3. 250mL无菌瓶；
4. 雪花碎冰；
5. 废液缸；
6. 75%医用酒精；
7. 试管架。
3. 仪器和软件
1. 分析天平、 压力蒸汽灭菌器、恒温培养摇床、生物安全柜、生化培养箱、菌落计数仪
2. IBM SPSS Statistics 24 数据编辑器
四、实验操作
1. 随机取2瓶购买的同批次的大鼠肝S9，准备10mLTA100菌液，4瓶灭完菌的100mL营养肉汤培养基；
2. 每瓶吸取0.1mL大鼠肝S9液到营养肉汤作为实验组，阴性对照组不添加物质，阳性对照组加入100uL的TA100菌液到营养肉汤，无菌测试结束。
3. 准备S9混合液相关的试剂，氯化钾溶液、氯化镁溶液，D-葡萄糖-6-磷酸-二钠盐溶液，氧化型辅酶2溶液、磷酸盐缓冲液，按照标准配比最后混合在一起使用，进行生物学活性鉴定；
4. 准备好10mLTA100菌液，阳性诱变剂一支BAP和一支2-NA，1瓶氯化钠注射液，冰浴的S9混合液，15块底琼脂培养基平板，15支顶琼脂培养基试管；
5. 往顶琼脂培养基里面加入100uL菌液，100uL阳性诱变剂，500uLS9液，再倾倒平板，作为试验组。对照组则添加100uL菌液、100uL氯化钠注射液和500uL S9液；
6. 37°C培养3天，观察生物学活性鉴定试验结果； 37°C培养5天，观察无菌试验结果。
五、注意事项
1. 大鼠肝S9液从-80°C取出后，全过程使用冰浴操作。
2. D-葡萄糖-6-磷酸-二钠盐、氧化型辅酶2从-20°C取出后，全过程使用冰浴操作。
3. S9混合液最后一步加入肝S9，此前的混合液使用0.45um膜过滤器除菌。
六、结果分析（可选）
37°C培养后，无菌试验结果，最终只有阳性对照组添加了TA100 菌液的生长，实验组跟阴性对照组无菌生长。
生物学活性试验结果，对照组生理盐水的菌落回复突变数跟添加了阳性诱变剂BAP或2-NA的数据相比，统计分析后差异性显著。
说明所使用的S9混合液是满足代谢活化系统要求的，可以用于试验检测。
七、参考文献（可选）
GB/T 16886.3-2019 医疗器械生物学评价 第3部分：遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验。
ISO 10993-3:2014 医疗器械生物学评价 第3部分：遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验。
ISO/TR 10993-33:2015 医疗器械生物学评价 第33部分：遗传毒性评价试验的指导原则—ISO 10993-3的补充。
OECD GUIDELINE FOR TESTING OF CHEMICALS Bacterial Reverse Mutation Test 471:2020
声明：该视频作品仅代表作者观点，用于共享科学技术。内容仅供大家参考，不代表本站立场。