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基因小鼠鉴定

郭海梦杨苏荣 |  2023-12-08  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1295
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视频简介小鼠基因鉴定的整个流程,从取材,提取DNA到跑核酸电泳到结果出示。
  • 视频介绍

一、视频摘要

使用聚合酶链式反应对基因工程小鼠的基因型鉴定的基本原理是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异,以小鼠基因组 DNA 为模板进行 PCR ,并以凝胶电泳对比不同基因型特异产物的大小,根据电泳条带差异来直接区分小鼠的不同基因型。该实验从提取小鼠基因组 DNA PCR反应到最后跑电泳都有介绍和讲解。

二、关键词

基因小鼠鉴定,PCR反应,小鼠基因组 DNA

 

三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

 

2. 试剂和耗材

试剂:

1、碘伏

2、TE buffer

3、PCR mix溶液

4、异丙醇

5、氯仿

6、乙醇

 

耗材:

11.5ml离心管

2、剪刀、镊子

3、50 ml离心管

4、PCR

 

3. 仪器和软件

1、金属浴(WEALTEC

2、离心机(CENTRIFUGE 5417R

3PCR仪(BIOER

4、电泳槽(BIO-RAD

5、电源(BIO-RAD

6、成像仪(BIO-RAD

四、实验操作

1、新生小鼠20天左右进行编号,按照编号剪取小鼠脚趾同时将小鼠脚趾放置到1.5 ml EP管中;

2、按照以下体系依次加入离心管中;

体系

体积/ul

DdH2O

350

Tris1MPH8.5

50

Nacl5M

40

EDTA0.5M

5

SDS10%

25

Protein K20mg/ml

5

Rnase10mg/ml

25

Tatal

500

3、将离心管放置金属浴55°,13h(过夜);

4、金属台上取出离心管,加入0.5ml氯仿,用力颠倒混匀,不需旋涡震荡;

5、室温,12000rpm15min

6、将上清移入新的离心管,加入等量异丙醇(约450ul),混匀;

7、弃上清,加入1ml预冷 70%乙醇,轻柔颠倒混匀以清洗DNA沉淀;

8、离心12000rpm15min

9、弃上清,空气中晾干DNA沉淀;

10、加入30ul TE buffer,溶解DNA4°保存,用于后续实验。

11

PCR反应体系

组分

体积/ul

ddH2O

9.0

Product primer F

1.0

Product primer R

1.0

Premix taq

12.5

DNA

1.5

Total

25

PCR程序

 

Temp

Time

Cycles

Initial denaturation

94°C

3min

 

Denaturation

94°C

30s

 

35X

Annealing

60°C

35s

Extension

72°C

35s

Additional extension

72°C

5min

 

12PCR产物跑电泳

等到PCR程序扩增结束以后,依次向每管中加入1000x GELred,最后利用浓度为 1.5%琼脂糖凝胶电泳检测目的DNA条带。

 

五、注意事项

1、抓取小鼠需小心,小鼠咬伤要及时打疫苗

2、剪取脚趾后要给小鼠进行消毒

3、进行PCR反应时在冰上操作

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