首页     短视频

琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物

黄馨 |  2023-12-08  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1313
观看次数: 3 次  复制链接
视频简介琼脂糖凝胶电泳以琼脂糖凝胶作支持体的电泳方式,利用核酸分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。常用于分离、鉴定以及纯化核酸分子。视频展示了琼脂糖凝胶电泳分离、鉴定PCR产物的一般流程。
  • 视频介绍

一、视频摘要

琼脂糖凝胶电泳以琼脂糖凝胶作支持体的电泳方式,利用核酸分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。常用于分离、鉴定以及纯化核酸分子。视频展示了琼脂糖凝胶电泳分离、鉴定PCR产物的一般流程。

 

二、关键词

琼脂糖凝胶电泳,鉴定PCR产物,分离DNA

 

三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

基因组DNA或质粒样品、酶切样品和PCR样品

 

2. 试剂和耗材

试剂:

1.    琼脂糖

2.    1X TAE电泳缓冲液

3.    核酸染液

4.    6X loading buffer

5.    Maker

6.    去离子水

 

耗材:

1.    移液枪头

2.    手套

 

 

3. 仪器和软件

1.电子天平

2.移液枪

3.量筒

4.锥形瓶

5.制胶器

6.微波炉

7.凝胶电泳系统(DYY-6C 双稳定时电泳仪)

8.凝胶成像分析系统

 

 

四、实验操作

1.制备凝胶和胶板:

称量0.25g琼脂糖( 三角瓶 +25ml(1×TAE) ,加热,溶解,冷却至60(不烫手),加核酸染料 0.5μl摇匀,倒板,室温下充分凝固,竖直拔下梳子

2.加样

5μl DNA+1μl 6×loading buffer 混匀,或6μl mix混合液;3μl DNA Marker

3.电泳

电压3-5V/cm,约100-120V30min,注意电极方向和观察溴酚蓝染液的迁移。

4.观察

紫外透射分析仪下观察电泳结果、照相。

 

五、注意事项

1.制备凝胶时,倒胶的温度不可太低,否则凝固不均匀;速度也不可太快,否则容易出现气泡。

2.胶一定要凝固好才能拔梳子,方向一定要竖直向上,不要弄坏点样孔

3.点样时枪头下伸,点样孔内不能有气泡,缓冲液不要太多。

4.注意每孔最大上样容量及样品孔体积,注意跑胶时间和电源正负极

声明:该视频作品仅代表作者观点,用于共享科学技术。内容仅供大家参考,不代表本站立场。