一、视频摘要
琼脂糖凝胶电泳以琼脂糖凝胶作支持体的电泳方式,利用核酸分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。常用于分离、鉴定以及纯化核酸分子。视频展示了琼脂糖凝胶电泳分离、鉴定PCR产物的一般流程。
二、关键词
琼脂糖凝胶电泳,鉴定PCR产物,分离DNA
三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1. 样品信息
基因组DNA或质粒样品、酶切样品和PCR样品
2. 试剂和耗材
试剂:
1. 琼脂糖
2. 1X TAE电泳缓冲液
3. 核酸染液
4. 6X loading buffer
5. Maker
6. 去离子水
耗材:
1. 移液枪头
2. 手套
3. 仪器和软件
1.电子天平
2.移液枪
3.量筒
4.锥形瓶
5.制胶器
6.微波炉
7.凝胶电泳系统(DYY-6C型 双稳定时电泳仪)
8.凝胶成像分析系统
四、实验操作
1.制备凝胶和胶板:
称量0.25g琼脂糖( 三角瓶 )+25ml(1×TAE) ,加热,溶解,冷却至60℃(不烫手),加核酸染料 0.5μl摇匀,倒板,室温下充分凝固,竖直拔下梳子 。
2.加样 :
5μl DNA+1μl 6×loading buffer 混匀,或6μl mix混合液;3μl DNA Marker
3.电泳 :
电压3-5V/cm,约100-120V,30min,注意电极方向和观察溴酚蓝染液的迁移。
4.观察
紫外透射分析仪下观察电泳结果、照相。
五、注意事项
1.制备凝胶时,倒胶的温度不可太低,否则凝固不均匀;速度也不可太快,否则容易出现气泡。
2.胶一定要凝固好才能拔梳子,方向一定要竖直向上,不要弄坏点样孔
3.点样时枪头下伸,点样孔内不能有气泡,缓冲液不要太多。
4.注意每孔最大上样容量及样品孔体积,注意跑胶时间和电源正负极
声明:该视频作品仅代表作者观点,用于共享科学技术。内容仅供大家参考,不代表本站立场。