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BCA法测蛋白浓度

张威, 王思萌, 隽中乾刘畅 |  2023-12-08  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1335
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视频简介BCA法基于双缩脲原理,碱性条件下蛋白质将Cu2+还原成Cu+,BCA鳌合Cu+作为显色剂,产生蓝紫色并在562nm有吸收峰,单价Cu+与蛋白质呈剂量相关性。可以根据待测蛋白在562nm处的吸光度计算待测蛋白浓度。
  • 视频介绍

一、视频摘要

BCA法基于双缩脲原理,碱性条件下蛋白质将Cu2+还原成Cu+BCA鳌合Cu+作为显色剂,产生蓝紫色并在562nm有吸收峰,单价Cu+与蛋白质呈剂量相关性。可以根据待测蛋白在562nm处的吸光度计算待测蛋白浓度。

 

二、关键词(3-5 个关键词便于被搜索)

BCA法,蛋白浓度,吸光度,显色

 

 

三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 试剂和耗材

① PBS溶液

② BCA蛋白浓度测定试剂盒(Beyotime-P0010S

1)       A

2)       B

3)       工作液

③ 蛋白样本

 

2. 仪器和软件

① 酶标仪

② 恒温箱

 

四、实验操作

① 待测蛋白样本用4℃离心机中离心后,抽取上清液用1.5ulEP管进行标记分装,以备检测时方便吸取

拿出提前准备好的96孔板,第一排加样孔中将标准品按01248121620µl加到96孔板的标准品孔中,并加入标准品稀释液(PBS)补足至20ul

② 根据样品数量,按50体积BCA试剂A1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀。例如5ml BCA试剂A100µl BCA试剂B,混匀,配制成5.1ml BCA工作液。

③ 加适当体积样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足20µl,加标准品稀释液补足到20µl

④ 各孔加入200µl BCA工作液。加完各孔板液体后,在37℃恒温箱内孵育30min

⑤ 用提前开机待使用的酶标仪进行测定,波长设定为562nm

⑥ 根据标准曲线和样本体积计算样本的的蛋白浓度

 

五、注意事项

① 因蛋白孔内无样品及标准品,则需要在空白孔内加入等量体积(20ulPBS

② 酶标仪操作步骤:

1)       点击新建,选择相应数量的标准品孔位置(8个),并根据梯度设定相应浓度值(标准品浓度分别为00.0250.050.10.20.30.40.5mg/ml);根据空白孔及样品孔位置及数量进行设置检测孔。

2)       点击操作,选择蛋白浓度测定,并设置相应波长(562nm

3)       点击运行,得出结果后可根据相应结果进行去掉空白操作

 

 

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