BCA法测蛋白浓度

一、视频摘要

BCA法基于双缩脲原理，碱性条件下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，BCA鳌合Cu+作为显色剂，产生蓝紫色并在562nm有吸收峰，单价Cu+与蛋白质呈剂量相关性。可以根据待测蛋白在562nm处的吸光度计算待测蛋白浓度。

二、关键词（3-5 个关键词便于被搜索）

BCA法，蛋白浓度，吸光度，显色

三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器

1. 试剂和耗材

①　PBS溶液

②　BCA蛋白浓度测定试剂盒（Beyotime-P0010S）

1)       A液

2)       B液

3)       工作液

③　蛋白样本

2. 仪器和软件

①　酶标仪

②　恒温箱

四、实验操作

①　待测蛋白样本用4℃离心机中离心后，抽取上清液用1.5ulEP管进行标记分装，以备检测时方便吸取

拿出提前准备好的96孔板，第一排加样孔中将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20µl加到96孔板的标准品孔中，并加入标准品稀释液（PBS）补足至20ul。

②　根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5ml BCA试剂A加100µl BCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。

③　加适当体积样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足20µl，加标准品稀释液补足到20µl。

④　各孔加入200µl BCA工作液。加完各孔板液体后，在37℃恒温箱内孵育30min

⑤　用提前开机待使用的酶标仪进行测定，波长设定为562nm。

⑥　根据标准曲线和样本体积计算样本的的蛋白浓度

五、注意事项

①　因蛋白孔内无样品及标准品，则需要在空白孔内加入等量体积（20ul）PBS

②　酶标仪操作步骤：

1)       点击新建，选择相应数量的标准品孔位置(8个），并根据梯度设定相应浓度值（标准品浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml）；根据空白孔及样品孔位置及数量进行设置检测孔。

2)       点击操作，选择蛋白浓度测定，并设置相应波长（562nm）

3)       点击运行，得出结果后可根据相应结果进行去掉空白操作