RAA扩增

一、视频摘要

RAA扩增基于重组酶介导链置换核酸扩增(RAA)技术开发的恒温核酸扩增检测试剂，在39℃恒温条件下特异识别并扩增目标样本的DNA片段。

二、关键词

RAA扩增 重组酶介导链置换核酸扩增 DNA扩增

三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

待测DNA样本

2. 试剂和耗材

试剂：

1.  RAA扩增试剂

2.  A Buffer

3.  上游引物

4.  纯净水

5.  下游引物

6.  B Buffer

耗材：

1.  10ul和100ul的枪和枪头

2.  EP管

3.  镊子

4.  剪刀

5.  记号笔

6.  试管架

3. 仪器和软件

1.  小型高速离心机

2.  琼脂糖凝胶电泳仪

3.  凝胶成像仪

四、实验操作

1.  实验前将所需试剂，耗材等放入生物安全柜中进行紫外线杀菌消毒，穿戴好防护用品后进行手消

2.  取出四个RAA核酸扩增试剂（装有反应干粉的检测单元管），一管作为阴性对照，其余三管为样品1.2.3

3.  配制混合物（Mix）反应体系：A Buffer 25ul 水 13.5ul 上游引物 2ul 下游引物 2ul

4.  取出EP管，配出四管所需的上述Mix混合体系，后分装到四管中，每管42.5ul

5.  向检测单元管中分别加入待测样本管1.2.3各5ul，阴性对照孔加入5ul水

6.  向单元管的四个盖子上分别加入2.5ul的B Buffer，用镊子盖上管盖，进行标记

7.  四只单元管充分混匀5到6次，离心15秒，取出孵育30min，孵育结束后，取出单元管再进行离心15秒

8.  将样本进行琼脂糖凝胶电泳检测，也可以通过氯仿抽提后，取上清进行检测

9.  使用凝胶成像仪进行图像采集和分析对比，扩增条带是否与目的片段大小一致

10. 实验结束后，检测过程中所产生的废弃物应按照相关规范进行处理

五、注意事项

1. 所需枪头，镊子，剪刀等应进行高压灭菌

2. 将所需试剂耗材等紫外线杀菌消毒至少半小时

3. 向管中加试剂时，尽量避免手碰到管盖内侧

4. 注意对试管中的试剂进行区分标记