视频简介1.活化PVDF膜 PVDF膜使用前需在甲醇中活化。先按照凝胶剪切大小适宜的PVDF膜,在平皿中倒入甲醇,用镊子夹着膜边角在甲醇里漂一下,膜由不透明变为均一的半透明即可,然后用镊子将膜转移到冰冷的转膜缓冲液中,使其平衡5min。转移分子量小于20kDa的蛋白时建议使用小孔径的膜 (如0.22μm),正常情况下使用0.45μm孔径的膜即可。2.切胶 用硬卡片撬开玻璃板,在转膜缓冲液中平衡3-5min,切除浓缩胶,留下含有目的蛋白的凝胶。3.构建“转膜三明治” 将转膜夹、海绵和滤纸浸没在含有转膜缓冲液的托盘中,在转膜夹的两面依次放置海绵和滤纸,并用滚轮擀去其中的气泡。然后小心把凝胶从玻璃板转移到转膜夹黑色面,并将PVDF膜与凝胶缓慢贴合,最后将转膜夹两面合到一起,并用白色滑块锁住夹套,形成“转膜三明治”(从负极到正极依次是海绵、滤纸、凝胶、PVDF膜、滤纸、海绵)。4.转膜 将“转膜三明治”插入转膜架并放入电泳槽,在电泳槽中加入转膜缓冲液直至没过“转膜三明治”,盖上安全盖,接上电源开始电泳。常见的转膜条件是100V,1-2h,电压和时间可