视频简介1.活化PVDF膜 PVDF膜使用前需在甲醇中活化。先按照凝胶剪切大小适宜的PVDF膜，在平皿中倒入甲醇，用镊子夹着膜边角在甲醇里漂一下，膜由不透明变为均一的半透明即可，然后用镊子将膜转移到冰冷的转膜缓冲液中，使其平衡5min。转移分子量小于20kDa的蛋白时建议使用小孔径的膜 (如0.22μm)，正常情况下使用0.45μm孔径的膜即可。2.切胶 用硬卡片撬开玻璃板，在转膜缓冲液中平衡3-5min，切除浓缩胶，留下含有目的蛋白的凝胶。3.构建“转膜三明治” 将转膜夹、海绵和滤纸浸没在含有转膜缓冲液的托盘中，在转膜夹的两面依次放置海绵和滤纸，并用滚轮擀去其中的气泡。然后小心把凝胶从玻璃板转移到转膜夹黑色面，并将PVDF膜与凝胶缓慢贴合，最后将转膜夹两面合到一起，并用白色滑块锁住夹套，形成“转膜三明治”(从负极到正极依次是海绵、滤纸、凝胶、PVDF膜、滤纸、海绵)。4.转膜 将“转膜三明治”插入转膜架并放入电泳槽，在电泳槽中加入转膜缓冲液直至没过“转膜三明治”，盖上安全盖，接上电源开始电泳。常见的转膜条件是100V，1-2h，电压和时间可