首页     短视频

细胞蛋白提取

于晴晴, 曹雅惠, 王鑫杜亚男 |  2023-12-08  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1363
观看次数: 1 次  复制链接
视频简介细胞蛋白提取是很重要的实验,后续的Wstern Blot是生物实验的一大难点,而做好Wstern Blot的前提,就是制备出了好的蛋白样本。本视频详细拍摄了细胞蛋白提取的整个过程,以及实验过程中一些重要细节的展示。
  • 视频介绍

一、视频摘要

细胞蛋白提取对于后续Western Blot实验来说是关键的一步,制备好的蛋白样本是Western Blot实验成功的前提,本实验原理是通过使用裂解液破坏细胞膜和细胞器膜,释放出细胞内的蛋白质,从而得到蛋白质样本,分离和获取特定的蛋白质样品,以便后续的研究和应用;通过本实验,我们成功提取了细胞样品中的蛋白质。

 

二、关键词

细胞、蛋白、肿瘤

 

三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

肿瘤细胞

 

2. 试剂和耗材

RIPA裂解液;PMSFPBS5×蛋白上样缓冲液;Ep

 

3. 仪器和软件

4℃离心机;电磁炉

 

 

四、实验操作

1RIPA:PMSF=1001配置,配完涡旋一下,放冰上备用。

 

2、吸出板里的培养液弃掉,用PBS洗,洗完后弃掉,风干后,每孔加适量裂解液,用刮子刮,全程在冰上,每孔间隔10分钟刮一次,全程一共裂解30min,而后全部吸入空1.5ep管后离心(12000r 10min)。

3、离心完毕,根据吸出的量加入四分之一体积的5×蛋白上样缓冲液,而后煮沸5min,放-20℃保存待用。

 

五、注意事项

1、选择合适的细胞/组织,确保所选样品有足够的目标蛋白质。

2、为了防止蛋白质的降解,蛋白质提取全程在冰上进行。

3、每孔操作应使用新的枪头,避免交叉污染。

声明:该视频作品仅代表作者观点,用于共享科学技术。内容仅供大家参考,不代表本站立场。