细胞蛋白提取

一、视频摘要

细胞蛋白提取对于后续Western Blot实验来说是关键的一步，制备好的蛋白样本是Western Blot实验成功的前提，本实验原理是通过使用裂解液破坏细胞膜和细胞器膜，释放出细胞内的蛋白质，从而得到蛋白质样本，分离和获取特定的蛋白质样品，以便后续的研究和应用；通过本实验，我们成功提取了细胞样品中的蛋白质。

二、关键词

细胞、蛋白、肿瘤

三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

肿瘤细胞

2. 试剂和耗材

RIPA裂解液；PMSF；PBS；5×蛋白上样缓冲液；Ep管

3. 仪器和软件

4℃离心机；电磁炉

四、实验操作

1、RIPA:PMSF=100：1配置，配完涡旋一下，放冰上备用。

2、吸出板里的培养液弃掉，用PBS洗，洗完后弃掉，风干后，每孔加适量裂解液，用刮子刮，全程在冰上，每孔间隔10分钟刮一次，全程一共裂解30min，而后全部吸入空1.5ep管后离心（12000r 10min）。

3、离心完毕，根据吸出的量加入四分之一体积的5×蛋白上样缓冲液，而后煮沸5min，放-20℃保存待用。

五、注意事项

1、选择合适的细胞/组织，确保所选样品有足够的目标蛋白质。

2、为了防止蛋白质的降解，蛋白质提取全程在冰上进行。

3、每孔操作应使用新的枪头，避免交叉污染。