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qPCR:原理、操作与数据分析之道

赵翔宇 |  2023-12-08  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1427
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视频简介在生物科学研究中,实时定量聚合酶链反应(qPCR)技术已成为基因表达量分析中最常使用的技术之一。本视频尽量为观众提供一次全面的qPCR介绍,涵盖从基础原理到实验设计与操作,以及如何通过数据分析技术洞悉实验结果。我们首先介绍qPCR的核心原理,理解这一技术如何能够实时监测DNA的扩增过程,并介绍在这一过程中涉及的重要术语,如阈值循环(Ct)值、效率和熔解曲线分析等。接下来,将介绍实验设计的要点,包括实验组和对照组选择、确定参考基因、设计及优化引物、设置重复等,确保能够进行可靠且有效的qPCR实验。在实验操作部分,我们将展示一次实验的全流程,从前期准备,到样品制备到反应体系的设置。数据分析是qPCR实验的重头戏,视频将指导用户如何解读实验数据,理解相对定量和绝对定量的方法,并通过案例分析,演示如何从实验数据中提取出具有生物学意义的信息。特别地,视频还将介绍一个开源的网站(https://xyzhao.shinyapps.io/qPCR/),方便快速高效地分析qPCR数据。通过本视频,我们希望大家不仅能够理解并学习qPCR的实验技术,还能更好的处理qPCR数据。