一、视频摘要
本实验通过盐析和凝胶层析将γ-球蛋白从血清中分离出来,并用双缩脲试剂和奈氏试剂对分离出来的γ-球蛋白进行鉴定,使大家掌握分离蛋白质的基本原理,了解柱层析技术。
二、关键词
血清γ-球蛋白、盐析、凝胶层析、双缩脲试剂、奈氏试剂
二、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1. 样品信息
2. 试剂和耗材
试剂:血清,葡聚糖凝胶G-100,饱和硫酸铵溶液,PBS(pH7.2的磷酸盐溶液),奈氏试剂,双缩脲试剂
耗材:胶头滴管,离心管,玻璃棒,烧杯,层析柱
3. 仪器和软件
离心机
四、实验操作
1、倒胶
2、2ml血清+2ml饱和(NH4)2SO2混合静置十分钟,5000r,七分钟弃上清。
3、沉淀+1mlPBS+0.5ml(NH4)2SO2混匀静置十分钟,5000r,七分钟弃上清。
4、加3滴PBS溶解沉淀备用。
5、装柱:高度10~15cm。调速10d/min。
6、上样:带PBS刚好进入液面,用长颈滴管全部加入γ-球蛋白。
7、收集:上样后开始数滴滴数,10滴每管,收集洗脱液。
8、鉴定:双缩脲试剂(鉴定蛋白质)由蓝色变为无色。奈氏试剂(鉴定铵根离子)由浅黄色变成橙红色。
9、记录
五、注意事项
无
六、结果分析(可选)
实验结果
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奈氏试剂
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双缩脲试剂
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观察呈色深浅用(-)(+)(++)(+++)(++++)表示
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