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血清γ-球蛋白的分离与鉴定

庞宏燕, 台殊可, 张鲁庚, 胡佳怡 和 韩英姿 |  2023-12-08  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1431
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视频简介本实验通过盐析和凝胶层析将γ-球蛋白从血清中分离出来,并用双缩脲试剂和奈氏试剂对分离出来的γ-球蛋白进行鉴定,使大家掌握分离蛋白质的基本原理,了解柱层析技术。
  • 视频介绍

一、视频摘要

本实验通过盐析和凝胶层析将γ-球蛋白从血清中分离出来,并用双缩脲试剂和奈氏试剂对分离出来的γ-球蛋白进行鉴定,使大家掌握分离蛋白质的基本原理,了解柱层析技术。

 

二、关键词

血清γ-球蛋白、盐析、凝胶层析、双缩脲试剂、奈氏试剂

二、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

 

 

2. 试剂和耗材

试剂:血清,葡聚糖凝胶G-100,饱和硫酸铵溶液,PBSpH7.2的磷酸盐溶液),奈氏试剂,双缩脲试剂

耗材:胶头滴管,离心管,玻璃棒,烧杯,层析柱

 

3. 仪器和软件

离心机

 

 

四、实验操作

1、倒胶

22ml血清+2ml饱和(NH42SO2混合静置十分钟,5000r,七分钟弃上清。

3、沉淀+1mlPBS+0.5mlNH42SO2混匀静置十分钟,5000r,七分钟弃上清。

4、加3PBS溶解沉淀备用。

5、装柱:高度10~15cm。调速10d/min

6、上样:PBS刚好进入液面,用长颈滴管全部加入γ-球蛋白。

7、收集:上样后开始数滴滴数,10滴每管,收集洗脱液。

8、鉴定:双缩脲试剂(鉴定蛋白质)由蓝色变为无色。奈氏试剂(鉴定铵根离子)由浅黄色变成橙红色。

9、记录

 

 

五、注意事项

 

六、结果分析(可选)

实验结果

 

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奈氏试剂

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++

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++

双缩脲试剂

++

+++

++

观察呈色深浅用()()(++)(+++)(++++)表示

 

 

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