视频摘要: 小鼠心脏灌流是进行组织切片、染色前的必要步骤。灌注生理盐水可以排出小鼠体内血液,灌注PFA可以固定组织,保持抗原结构。本视频演示了小鼠心脏灌流时的基本操作。
实验样品信息,试剂、耗材或仪器:
所需试剂:
氯化钠(生工,catalog number: A501218)
NaH2PO4·2H2O(沪试,catalog number: 20040718)
Na2HPO4·12H2O(沪试,catalog number:10020318)
多聚甲醛(Sigma,catalog number: 158127)
生理盐水 (0.9%氯化钠溶液)
4%多聚甲醛溶液 [溶于0.1 M磷酸缓冲液 (PB),pH 7.0~7.4,见溶液配方]
药品
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分子量
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工作浓度
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1升所需(克)
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2升所需(克)
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4升所需(克)
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5升所需(克)
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二水合磷酸二氢钠
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156.01
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0.020
摩尔/升
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3.1202
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6.2404
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12.4808
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15.601
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十二水合磷酸氢二钠
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358.14
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0.080
摩尔/升
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28.651
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57.302
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114.605
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143.256
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多聚甲醛
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30.03
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4%
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40
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80
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160
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200
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所需仪器设备:
1. 通风橱
2. 解剖镊(瑞沃德,catalog number: F12018-13)
3. 眼科镊(瑞沃德,catalog number: F12006-10)
4. 止血钳(瑞沃德,catalog number: F21002-12)
5. 解剖剪(瑞沃德,catalog number: S13052-12)
6. 精细剪(瑞沃德,catalog number: S12005-10)
7. 4号或5号静脉输液针(丰临)
8. 20毫升注射器(洪达,catalog number: zsq08)
实验或操作注意事项:
1.进针位置要准确,不宜太深,否则针尖会插入右心室,影响灌流效果。
2.针筒内应避免存留气泡,否则气泡容易被推入小鼠体内,堵塞血管,影响灌流效果。
3.成年小鼠生理盐水灌注约30ml,pfa灌注约20ml,灌注时尽量保持匀速。
[关键词] 心脏灌流,左心室,免疫染色
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