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小鼠心脏灌流

吴锦云, 吴晓阳, 蔡予琦何苗 |  2020-12-29  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v628
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视频简介 小鼠心脏灌流是免疫染色、原位杂交等实验的前置步骤。灌流是否成功直接影响免疫染色或原位杂交的实验效果。本视频完整拍摄了小鼠心脏灌流及取脑的各个步骤,希望能够为灌流初学者提供参考借鉴。
  • 视频介绍

视频摘要: 小鼠心脏灌流是进行组织切片、染色前的必要步骤。灌注生理盐水可以排出小鼠体内血液,灌注PFA可以固定组织,保持抗原结构。本视频演示了小鼠心脏灌流时的基本操作。
 

实验样品信息,试剂、耗材或仪器:

所需试剂:

氯化钠(生工,catalog number: A501218)

NaH2PO4·2H2O(沪试,catalog number: 20040718)

Na2HPO4·12H2O(沪试,catalog number:10020318)

多聚甲醛(Sigma,catalog number: 158127)

生理盐水 (0.9%氯化钠溶液) 

4%多聚甲醛溶液 [溶于0.1 M磷酸缓冲液 (PB),pH 7.0~7.4,见溶液配方]

药品 分子量 工作浓度 1升所需(克) 2升所需(克) 4升所需(克) 5升所需(克)
二水合磷酸二氢钠 156.01

0.020

摩尔/升

3.1202 6.2404 12.4808 15.601
十二水合磷酸氢二钠 358.14

0.080

摩尔/升

28.651 57.302 114.605 143.256
多聚甲醛 30.03 4% 40 80 160 200

 

所需仪器设备:

1.  通风橱

2.  解剖镊(瑞沃德,catalog number: F12018-13)

3.  眼科镊(瑞沃德,catalog number: F12006-10)

4.  止血钳(瑞沃德,catalog number: F21002-12)

5.  解剖剪(瑞沃德,catalog number: S13052-12)

6.  精细剪(瑞沃德,catalog number: S12005-10)

7.  4号或5号静脉输液针(丰临)

8.  20毫升注射器(洪达,catalog number: zsq08)

实验或操作注意事项:  

1.进针位置要准确,不宜太深,否则针尖会插入右心室,影响灌流效果。

2.针筒内应避免存留气泡,否则气泡容易被推入小鼠体内,堵塞血管,影响灌流效果。

3.成年小鼠生理盐水灌注约30ml,pfa灌注约20ml,灌注时尽量保持匀速。

[关键词] 心脏灌流,左心室,免疫染色
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