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小鼠心脏灌流及取脑实验

祁明辉 |  2020-12-29  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v629
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视频简介 许多时候,特别是需要做脑切片的时候,我们需要对小鼠进行灌流,本视频演示了一种常用的灌流方法-心脏灌流以及取脑组织的步骤。
实验准备:止血钳、弯头捏、眼科剪、1mL注射器、泡沫板、灌流废液容器、恒流泵、PBS以及麻醉剂。
实验步骤:
1、注射致死剂量麻醉剂麻醉小鼠,监测小鼠至掐尾尖无反应;
2、将小鼠固定于泡沫板;
3、打开胸腔表面皮肤,剪开胸腔下方腹腔,暴漏横膈膜,剪开横膈膜;
4、剪断两侧肋骨、用镊子夹着尖突向上折(也可用止血钳夹住胸骨向上折),暴漏心脏;
5、剪开右心耳,将灌流针枕头插入左心室(注意不要插入太深,针尖进去后再插1mm左右即可,否则容易进入肺循环,灌流时小鼠口鼻出水,效果不佳);
6、开始灌流,打开恒流泵,快速灌注PBS(本视频用的该恒流泵最高流速:100rpm,待流出液体透明无血液时,即可停止灌流,此时小鼠肝脏由红变白;
7、沿小鼠两耳外侧剪开头皮,剪断眼眶之间骨头,用剪刀从眼眶之间沿着中线向上剪(入剪要浅,避免损伤脑形态),用镊子掰开脑壳,然后从嗅球向下轻轻拨下脑子,取脑完成。