番茄组织培养

番茄植物组织培养：

无菌苗培养：番茄种子用75%的酒精消毒2分钟，灭菌水冲洗三次，再用花王消毒10分钟，灭菌水清洗七次以上，置于100 ml 锥形瓶内在25℃、100 rpm条件下，灭菌水浸泡过夜催芽，48小时后然后摆放在1/2 MS 固体培养基上，置于智能光照培养箱培养至子叶展开。

切取子叶获得外植体：子叶展开后于超净工作台内切取子叶置于 MS 液培养基浸泡 1 小时，用无菌滤纸吸干残留液体培养基，置于预培养培养基上，子叶正面朝上避光培养两天。

农杆菌侵染及共培养：剪叶片的当天挑取备用活化的阳性农杆菌菌落于5 ml YEB 液体培养基 ( 加入相应抗生素 ) 在恒温培养摇床上28℃黑暗条件下200rpm过夜震荡培养菌液，隔天吸取小摇体系1.5 ml 于50 ml YEB 液体培养基 ( 加入相应抗生素 )大摇，培养至菌液OD 600=1.8-2.0，离心后用40 ml MS 盐培养液重悬备用。将预培养子叶浸泡在备用重悬菌液中15分钟，用无菌滤纸吸干子叶上多余菌液，子叶反面朝上放回原培养基共培养2天。

外植体筛选：将子叶翻面转移至诱导培养基上，在智能光照培养箱25℃和16小时光照条件下培养，间隔两周更换一次培养基，直至愈伤组织形成。

外植体继代：将愈伤组织转移至生长培养基诱导出芽成苗。

生根培养：愈伤组织长出生长点后切取生长点转移至生根培养基上诱导生根，挑选长出须根的幼苗进行炼苗移栽备用。

MS盐培养液：4.3g/L MS Salts Power 、30g/L 蔗糖

预培养培养基：MS 固体培养基，1.75mg/L ZT、1mg/L IAA

诱导培养基：MS 固体培养基，1.75mg/L ZT、1mg/L IAA、75mg/L Kan、200mg/L Tim

生长培养基：MS 固体培养基，1.75g/L ZT、1g/L IAA、50mg/L Kan、200mg/L Tim

生根培养基：MS 固体培养基，50mg/L Kan、200mg/L Tim 

参考文献：

[1] 李景富, 番茄遗传育种研究, 中国瓜菜, (2007) 10-10.

[2] 山红艳, 番茄组织培养体系的建立及特异蛋白表达差异的研究, 东北师范大学, 2002.

[3] 蔡时可, 张华通, 林晓萍, 罗焕明, 邓瑞云, 木本番茄组织培养快速繁殖技术研究, 广东农业科学, 40 (2013) 44-44.

[4] T. Fukami, G. Mackinney, Culture of Tomato Callus Tissue, Nature, 213 (1967) 944-945.

[5] M.E. Compton, R.E. Veilleux, Variation for genetic recombination among tomato plants regenerated from three tissue culture systems, Genome, 34 (1990) 810-817.