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番茄组织培养

韩鸿宇 |  2020-12-29  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v658
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视频简介 番茄是世界范围内重要的经济作物,同时也是科学研究中必不可少的模式植物。随着植物基因工程的发展,植物组织培养技术在理论研究和实践应用中具有重要意义,植物组织培养已发展为功能基因组学研究的基础。番茄组织培养为研究植物细胞的分化、发育以及功能表达提供良好的研究体系,为研究遗传学、细胞学、植物生理生化、病理学等提供了良好的研究方法,并且番茄的组织培养能更快更好地获得具有良好农艺性状的新品种,甚至还可以使番茄作为生产食用疫苗的生物反应器。
  • 视频介绍

番茄植物组织培养:

番茄组培流程

无菌苗培养:番茄种子用75%的酒精消毒2分钟,灭菌水冲洗三次,再用花王消毒10分钟,灭菌水清洗七次以上,置于100 ml 锥形瓶内在25℃、100 rpm条件下,灭菌水浸泡过夜催芽,48小时后然后摆放在1/2 MS 固体培养基上,置于智能光照培养箱培养至子叶展开。

切取子叶获得外植体:子叶展开后于超净工作台内切取子叶置于 MS 液培养基浸泡 1 小时,用无菌滤纸吸干残留液体培养基,置于预培养培养基上,子叶正面朝上避光培养两天。

农杆菌侵染及共培养:剪叶片的当天挑取备用活化的阳性农杆菌菌落于5 ml YEB 液体培养基 ( 加入相应抗生素 ) 在恒温培养摇床上28℃黑暗条件下200rpm过夜震荡培养菌液,隔天吸取小摇体系1.5 ml 于50 ml YEB 液体培养基 ( 加入相应抗生素 )大摇,培养至菌液OD 600=1.8-2.0,离心后用40 ml MS 盐培养液重悬备用。将预培养子叶浸泡在备用重悬菌液中15分钟,用无菌滤纸吸干子叶上多余菌液,子叶反面朝上放回原培养基共培养2天。

外植体筛选:将子叶翻面转移至诱导培养基上,在智能光照培养箱25℃和16小时光照条件下培养,间隔两周更换一次培养基,直至愈伤组织形成。

外植体继代:将愈伤组织转移至生长培养基诱导出芽成苗。

生根培养:愈伤组织长出生长点后切取生长点转移至生根培养基上诱导生根,挑选长出须根的幼苗进行炼苗移栽备用。

 

 

MS盐培养液:4.3g/L MS Salts Power 、30g/L 蔗糖

预培养培养基:MS 固体培养基,1.75mg/L ZT、1mg/L IAA

诱导培养基:MS 固体培养基,1.75mg/L ZT、1mg/L IAA、75mg/L Kan、200mg/L Tim

生长培养基:MS 固体培养基,1.75g/L ZT、1g/L IAA、50mg/L Kan、200mg/L Tim

生根培养基:MS 固体培养基,50mg/L Kan、200mg/L Tim 

 

参考文献:

[1] 李景富, 番茄遗传育种研究, 中国瓜菜, (2007) 10-10.

[2] 山红艳, 番茄组织培养体系的建立及特异蛋白表达差异的研究, 东北师范大学, 2002.

[3] 蔡时可, 张华通, 林晓萍, 罗焕明, 邓瑞云, 木本番茄组织培养快速繁殖技术研究, 广东农业科学, 40 (2013) 44-44.

[4] T. Fukami, G. Mackinney, Culture of Tomato Callus Tissue, Nature, 213 (1967) 944-945.

[5] M.E. Compton, R.E. Veilleux, Variation for genetic recombination among tomato plants regenerated from three tissue culture systems, Genome, 34 (1990) 810-817.

[关键词] 番茄,植物组织培养,转基因技术
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