微生物对亚碲酸钾的耐受性与还原性测定

一、视频摘要

该实验方案着重于亚碲酸盐高耐受性菌的分选及其对亚碲酸盐还原能力的测定。通过简单的颜色反应，分选优势菌株，使用硼氢化钠作为检测试剂，多功能酶标仪测定其吸光度，监测微生物对亚碲酸盐还原过程，评估微生物对亚碲酸盐的解毒能力。该方案具有易于操作、重复性好以及灵敏度高等优点。

二、关键词

细菌；亚碲酸盐；耐受性；还原性；快速检测；

三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器

1.样品信息

肠杆菌（Enterobacter.sp）分离自湖北师范大学；

2.试剂和耗材

亚碲酸钾（上海易恩化学技术有限公司）

硼氢化钠（天津市科密欧化学试剂有限公司）

3.仪器和软件

恒温震荡摇床（TS-2102C,金坛良友）

多功能酶标仪（SpectraMax i3x, Molecular Devices, CA, USA）

SoftMax Pro

GraphPad Prism 9.0

四、实验操作

1.微生物对亚碲酸盐的耐受性测试

（1）按照1：100的比例，在5 mL液体培养基中接种50 mL种子液；

（2）在上述体系中加入不同终浓度的亚碲酸钾溶液，保留空白对照；

（3）在37℃，150 rpm的条件下，培养1-2天；

（4）通过颜色的变化，判断微生物对亚碲酸盐的耐受性。

2.微生物对亚碲酸盐的耐受性测试

2.1制备标准曲线

（1）配制5 mg/mL硼氢化钠（现配现用）；

（2）配制10 mM的K2TeO3，并且进行8次倍比稀释，留0值；

（3）c.配制300 mM的PBS（pH 7）；

（4）在500 mL的离心管中加入50 mL硼氢化钠、50 mL亚碲酸钾和200 mL PBS，混合均匀，在60℃条件下，反应10 min；

（5）取反应溶液200 mL到96孔板中，在OD₅₀₀下测定吸光度，制作标准曲线。

2.2定时取样

（1）在100 mL培养基中接种500 mL的菌液，并加入终浓度为0.5 mM的亚碲酸钾溶液；

（2）37℃，150 rpm条件下，间隔4 h取样1 mL；

（3）样品在12000 rpm条件下，离心5 min；

（4）取样上清于-20℃冷冻；

（5）取样结束后，按上述条件进行处理与检测。

2.3数据分析

（1）通过多功能酶标仪与SoftMax Pro软件获取实验数据；

（2）使用GraphPad Prism 9.0分析实验数据与绘图。

五、注意事项

1.有关菌种相关实验，需要在超净工作台进行无菌操作；

2.制备标准曲线时，硼氢化钠溶液需要现配现用；

3.亚碲酸钾为剧毒物质，使用时注意戴手套，废弃物需特定处理；