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外泌体RNA的提取与逆转录

米紫玥 |  2021-12-10  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v974
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视频简介外泌体是一种能被大多数细胞所分泌的微小囊泡,直径为30-150nm,其内富含特异蛋白、脂质、核酸等多种生物活性物质。本视频使用Qiagen RNA提取试剂盒提取外泌体总RNA,与Trizol法相比,Qiagen RNA提取试剂盒更加方便、省时、快捷。为提高逆转录效率,RNA提取后立即进行逆转录,同样使用Qiagen 逆转录试剂盒。逆转录后的cDNA可以进行后续qRT-PCR实验,也可置于-20℃保存。
  • 视频介绍
  • 评审评语摘选

一、视频摘要

本视频使用QIAGEN试剂盒提取血浆外泌体总RNA,并用加尾法对其中microRNA进行逆转录。

二、关键词

外泌体、RNA、加尾法

三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

人血浆外泌体

2. 试剂和耗材

RNA提取试剂盒 QIAGEN 货号:217184

逆转录试剂盒(加尾法用)QIAGEN 货号:218161

3. 仪器和软件

离心机:高通量快速PCR

PCR仪:普通台式高速离心机

四、实验操作

1.RNA提取:裂解,萃取,过柱,洗涤,重悬;

2.逆转录:根据试剂盒说明书进行操作。

五、注意事项

1.RNA提取过程中药佩戴口罩、手套,尽量减少说话;

2.需使用无菌无酶EP管、枪头等耗材;

3.裂解样本时需要避光;

4.若进行下游qPCR实验,需要购买外参,在RNA提取过程中加入外参;

5.第一次离心后要小心吸取上层水相,避免吸入中间的白色沉淀和下层有机相;

6.RNA提取后应立即进行逆转录,避免RNA降解导致实验失败;

7.逆转录酶使用时从冰箱拿出,使用完毕后立即放入冰箱,备冰盒使用。

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外泌体为当前研究热点,视频适合指导新手。
作品详细展示了RNA提取与逆转录的步骤,可适用于外泌体,亦可使用于细胞或组织RNA提取。因此建议作品题目略做调整。
希望能提高视频清晰度,可增加注释部分内容。
视频流畅生动,操作规范,详细介绍了RNA的提取与逆转录技术操作流程,具有较高实用性。
该视频展示了如何进行外泌体RNA的提取与逆转录。视频拍摄清晰、完整,操作规范,细节比较详细,但由于是使用试剂盒提取及逆转录,Qiagen试剂盒一般说明书都比较详细,故该实验实用性则有所欠缺。