一、视频摘要
本视频使用QIAGEN试剂盒提取血浆外泌体总RNA,并用加尾法对其中microRNA进行逆转录。
二、关键词
外泌体、RNA、加尾法
三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1. 样品信息
人血浆外泌体
2. 试剂和耗材
RNA提取试剂盒 QIAGEN 货号:217184
逆转录试剂盒(加尾法用)QIAGEN 货号:218161
3. 仪器和软件
离心机:高通量快速PCR
PCR仪:普通台式高速离心机
四、实验操作
1.RNA提取:裂解,萃取,过柱,洗涤,重悬;
2.逆转录:根据试剂盒说明书进行操作。
五、注意事项
1.RNA提取过程中药佩戴口罩、手套,尽量减少说话;
2.需使用无菌无酶EP管、枪头等耗材;
3.裂解样本时需要避光;
4.若进行下游qPCR实验,需要购买外参,在RNA提取过程中加入外参;
5.第一次离心后要小心吸取上层水相,避免吸入中间的白色沉淀和下层有机相;
6.RNA提取后应立即进行逆转录,避免RNA降解导致实验失败;
7.逆转录酶使用时从冰箱拿出,使用完毕后立即放入冰箱,备冰盒使用。
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外泌体为当前研究热点,视频适合指导新手。
作品详细展示了RNA提取与逆转录的步骤,可适用于外泌体,亦可使用于细胞或组织RNA提取。因此建议作品题目略做调整。
希望能提高视频清晰度,可增加注释部分内容。
视频流畅生动,操作规范,详细介绍了RNA的提取与逆转录技术操作流程,具有较高实用性。
该视频展示了如何进行外泌体RNA的提取与逆转录。视频拍摄清晰、完整,操作规范,细节比较详细,但由于是使用试剂盒提取及逆转录,Qiagen试剂盒一般说明书都比较详细,故该实验实用性则有所欠缺。