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Dot blot

李祥 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v988
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视频简介使用离心柱法提取细胞DNA,然后进行dot blot实验检测细胞DNA中的6mA甲基化程度
  • 视频介绍

一、视频摘要

Dot blot实验包括蛋白质、DNARNA dot blot实验,又称为斑点印记,用于半定量检测相应物质的含量。本实验主要展示的是DNA 6mA dot blot实验,首先使用离心柱法提取细胞基因组DNA,然后通过dot blot法检测基因组中的DNA 6mA含量。



二、关键词

Dot blotDNA,斑点印记,6mA


三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

肝细胞癌Huh7细胞系


2. 试剂和耗材

DNA提取试剂盒(天根),DNA 6mA抗体(Synaptic system),山羊抗兔二抗(Abclonal),ECL显色液(碧云天),脱脂奶粉(碧云天),NC


3. 仪器和软件

显影仪(BIO-RAD


四、实验操作

1.使用天根DNA提取试剂盒提取细胞基因组DNA

2.DNA进行稀释配平后变性

3.点样,风干后紫外交联,再用脱脂奶粉进行封闭

4.一抗4℃封闭过夜

5.TBST洗膜后二抗室温封闭1小时

6.显影


五、注意事项

膜要风干,否则滴加DNA容易昀开

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