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小鼠解剖及各组织蛋白提取

胡志娟 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v990
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视频简介材料与试剂 1、 镊子、剪刀若干 2、 细胞培养皿 3、 记号笔 4、 酒精 5、 研磨管、研磨珠 6、 RIPA 裂解液及 PMSF 7、 液氮 实验步骤 1、 处死小鼠,用酒精喷壶喷湿小鼠全身; 2、 将小鼠腹部朝上,用镊子轻提腹部皮肤,在腹部开一小口,用镊子夹住皮肤边缘,用刀 背轻轻分离皮肤,并将皮肤拨向两侧,依次取出小鼠各脏器; 3、 用 PBS 将组织洗净,取绿豆粒大小装进研磨管(若第二天研磨,可先用液氮速冻),加 入 5mm 研磨珠及 RIPA 裂解液; 4、 将样品放入研磨仪中研磨; 5、 利用非接触式全自动超声波细胞破碎仪进行超声破碎; 6、 12000g 离心收上清即为蛋白样品,加入 lodding buffer 于 100°C 加热 5-10min。 注意事项 1、 为了防止蛋白样品降解,全程尽量在冰上进行操作; 2、 研磨的样品尽量小,绿豆粒大小即可,千万不宜过大; 3、 使用液氮速冻样品时,先用锡纸进行包裹,再程序降温,防止研磨管爆裂。
  • 视频介绍

一、视频摘要

本视频主要讲述小鼠各组织的解剖过程以及组织蛋白的提取过程,为研究蛋白分子功能提供了有利的工具。



二、关键词

小鼠、组织提取、western blot


三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

小鼠


2. 试剂和耗材

  1. 镊子、剪刀若干

  2. 细胞培养皿

  3. 记号笔

  4. 酒精

  5. 研磨管、研磨珠

  6. RIPA 裂解液及 PMSF

  7. 液氮


3. 仪器和软件

组织研磨仪、非接触式全自动超声波细胞破碎仪、冷冻离心机



四、实验操作

  1. 处死小鼠,用酒精喷壶喷湿小鼠全身;

  2. 将小鼠腹部朝上,用镊子轻提腹部皮肤,在腹部开一小口,用镊子夹住皮肤边缘,用刀

  3. 背轻轻分离皮肤,并将皮肤拨向两侧,依次取出小鼠各脏器;

  4. PBS 将组织洗净,取绿豆粒大小装进研磨管(若第二天研磨,可先用液氮速冻),加

  5. 5mm 研磨珠及 RIPA 裂解液;

  6. 将样品放入研磨仪中研磨;

  7. 利用非接触式全自动超声波细胞破碎仪进行超声破碎;

  8. 12000g 离心收上清即为蛋白样品,加入 lodding buffer 100°C 加热 5-10min


五、注意事项

  1. 为了防止蛋白样品降解,全程尽量在冰上进行操作;

  2. 研磨的样品尽量小,绿豆粒大小即可,千万不宜过大;

  3. 使用液氮速冻样品时,先用锡纸进行包裹,再程序降温,防止研磨管爆裂。

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