一、视频摘要
本视频主要讲述小鼠各组织的解剖过程以及组织蛋白的提取过程,为研究蛋白分子功能提供了有利的工具。
二、关键词
小鼠、组织提取、western
blot
三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1. 样品信息
小鼠
2. 试剂和耗材
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镊子、剪刀若干
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细胞培养皿
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记号笔
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酒精
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研磨管、研磨珠
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RIPA 裂解液及 PMSF
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液氮
3. 仪器和软件
组织研磨仪、非接触式全自动超声波细胞破碎仪、冷冻离心机
四、实验操作
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处死小鼠,用酒精喷壶喷湿小鼠全身;
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将小鼠腹部朝上,用镊子轻提腹部皮肤,在腹部开一小口,用镊子夹住皮肤边缘,用刀
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背轻轻分离皮肤,并将皮肤拨向两侧,依次取出小鼠各脏器;
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用 PBS 将组织洗净,取绿豆粒大小装进研磨管(若第二天研磨,可先用液氮速冻),加
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入 5mm 研磨珠及 RIPA 裂解液;
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将样品放入研磨仪中研磨;
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利用非接触式全自动超声波细胞破碎仪进行超声破碎;
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12000g 离心收上清即为蛋白样品,加入 lodding
buffer 于 100°C 加热 5-10min。
五、注意事项
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为了防止蛋白样品降解,全程尽量在冰上进行操作;
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研磨的样品尽量小,绿豆粒大小即可,千万不宜过大;
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使用液氮速冻样品时,先用锡纸进行包裹,再程序降温,防止研磨管爆裂。
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