关键词: 柑橘, 组培, 培养基
材料与试剂
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活性炭
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KNO3
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NH4NO3
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KH2PO4
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MgSO4·7H2O
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CaCl2·2H2O
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KI
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H3BO3
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ZnSO4·7H2O
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NaMoO4·2H2O
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CuSO4·5H2O
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CoCl2·H2O
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MnSO4·4H2O
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VB1 (盐酸硫氨素) (Genview, catalog number: HV365)
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VB6 (盐酸吡哆素) (Genview, catalog number: HV368)
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VB3 (烟酸) (Genview, catalog number: HV364)
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VB
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VC (北京鼎国昌盛生物技术有限公司)
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肌醇 (北京鼎国昌盛生物技术有限公司)
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微量
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铁盐
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甘氨酸 (国药集团有限公司,catalog number: 62011519)
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大量元素
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蔗糖
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琼脂
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麦芽提取物
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L-谷氨酰胺
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BA (Genview)
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KT
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NAA (Genview, catalog number: IN211)
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IAA
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GA3 (Genview, catalog number: AG140)
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IBA (Genview, catalog number: II172)
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蛋白胨
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酵母提取物
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氯化钠
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水解络蛋白
仪器设备
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量筒
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烧杯
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玻璃棒
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棕色细口瓶
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5 L存储瓶
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天平
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4 °C冰箱
实验步骤
一、培养基母液的配制
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大量元素 (10倍液):称取下列药品分别溶解定容到1 L后,加到5 L存储瓶中。
KNO3
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95 g
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NH4NO3
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82.5 g
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KH2PO4
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8.5 g
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MgSO4·7H2O
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18.5 g
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CaCl2·2H2O
|
22.0 g
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注:
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微量元素母液的配制 (100倍):取少量 (200-300 ml) 温水依次加入下列药品,每加一种药品后搅拌溶解,最后定容到1 L。
KI
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0.083 g
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H3BO3
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0.62 g
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ZnSO4·7H2O
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0.86 g
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NaMoO4·2H2O
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0.025 g
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CuSO4·5H2O
|
0.0025 g
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CoCl2·6H2O
|
0.0025 g
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MnSO4·4H2O
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2.23 g (MnSO4·H2O 1.69 g)
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注:
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甘氨酸和肌醇的配制 (100倍):甘氨酸0.2 g溶解定容到1 L,肌醇10 g溶解定容到1 L。
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铁盐的配制 (100倍):称取EDTA 3.73 g,FeSO4·7H2O 2.78 g,分别溶解后混合定容到1 L,放入棕色细口瓶中,室温放置10 h以上 (防止结晶沉淀),然后放入4 °C冰箱。
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维生素B的配制 (100倍)
MT:
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VB1 (盐酸硫氨素)
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1 g
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MS:
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10 mg
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VB6 (盐酸吡哆素)
|
1 g
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50 mg
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VB3 (烟酸)
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0.5 g
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|
50 mg
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分别按顺序称取溶解在温热的蒸馏水中,定容到1 L。
注:需要溶解完一个再加另一个,VB3不易溶解,需要搅拌,必要时可以加热。
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VC的配制:称取VC 0.5 g 溶解在蒸馏水中,定容到1 L即可。
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其他:BA,NAA,IBA,GA3等激素类试剂可先用少量1 M NaOH彻底溶解,再加水定容。配好后在室温放置一段时间,再放入4 ℃冰箱中冷藏保存。有些试剂在乙醇或盐酸中也可溶解,但比较而言,用碱溶解比较稳定,不易产生沉淀。
注:母液最好不要配制太多,如果配制的量较大,短时间内用不完,最好分装一部分到小的细口瓶中,在做培养基时使用。这样不容易产生沉淀。
二、各种培养基配方
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MT基本培养基 (1 L)
VB
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10 ml
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VC
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10 ml
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肌醇
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10 ml
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微量
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10 ml
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铁盐
|
10 ml
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甘氨酸
|
10 ml
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大量元素
|
100 ml
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蔗糖
|
40 g
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琼脂
|
8 g
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MT悬浮培养基 (1 L)
VB
|
10 ml
|
VC
|
10 ml
|
肌醇
|
10 ml
|
微量
|
10 ml
|
铁盐
|
10 ml
|
甘氨酸
|
10 ml
|
大量元素
|
100 ml
|
蔗糖
|
40 g
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麦芽提取物
|
0.5 g
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L-谷氨酰胺
|
1.5 g
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MT播种培养基 (1 L)
VB
|
10 ml
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VC
|
10 ml
|
肌醇
|
10 ml
|
微量
|
10 ml
|
铁盐
|
10 ml
|
甘氨酸
|
10 ml
|
大量元素
|
100 ml
|
蔗糖
|
25 g
|
琼脂
|
8 g
|
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生芽培养基 (1 L)
VB
|
10 ml
|
VC
|
10 ml
|
肌醇
|
10 ml
|
微量
|
10 ml
|
铁盐
|
10 ml
|
甘氨酸
|
10 ml
|
大量元素
|
100 ml
|
蔗糖
|
40 g
|
BA
|
0.5 mg
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KT
|
0.5 mg
|
NAA
|
0.1 mg
|
琼脂
|
8 g
|
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伸长培养基 (1 L)
VB
|
10 ml
|
VC
|
10 ml
|
肌醇
|
10 ml
|
微量
|
10 ml
|
铁盐
|
10 ml
|
甘氨酸
|
10 ml
|
大量元素
|
100 ml
|
蔗糖
|
40 g
|
BA
|
0.1 mg
|
IAA
|
0.5 mg
|
GA3
|
0.5 mg
|
琼脂
|
8 g
|
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生根培养基 (1 L)
VB
|
10 ml
|
VC
|
10 ml
|
肌醇
|
10 ml
|
微量
|
10 ml
|
铁盐
|
10 ml
|
甘氨酸
|
10 ml
|
大量元素
|
50 ml
|
蔗糖
|
25 g
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IBA
|
0.1 mg
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NAA
|
0.5 mg
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活性炭
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0.5 g
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琼脂
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8 g
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注:以上培养基PH应调到5.8-6.0之间,配好分装灭菌后使用,各类激素可配成母液按照相对应的量吸取加入即可。
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液体LB培养基 (1 L)
蛋白胨
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10 g
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酵母提取物
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5 g
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氯化钠
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10 g
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固体LB培养基 (1 L)
蛋白胨
|
10 g
|
酵母提取物
|
5 g
|
氯化钠
|
10 g
|
琼脂
|
15 g
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注:固体液体培养基均不需要调pH,配好分装灭菌后使用。
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YEB培养基 (1 L)
蛋白胨
|
1 g
|
酵母提取物
|
5 g
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水解络蛋白
|
5 g
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七水硫酸镁
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0.493 g
|
琼脂
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15-20 g
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注:YEB培养基pH为7.0,可不调pH。
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