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果蝇肠道上皮干细胞克隆的诱导和大小分析
Induction and Analysis of Intestinal Stem Cell Clones in the
Drosophila
Midgut
Authors:
殷畅
袭荣文
and
date:
06/20/2019,
view:
7109,
Q&A:
0
通过这一技术,我们可以在成体
果蝇
肠道
上皮
中诱导特定基因激活或沉默的单细胞克隆,并通过观察克隆内外细胞形态和组成的差异研究特定基因在
果蝇
肠道
上皮
干细胞自我更新和分化过程中发挥的功能。 通过这一技术,我们可以在成体
果蝇
肠道
上皮
中诱导特定基因突变、激活或沉默的干细胞克隆,从而进一步研究特定基因在
果蝇
肠道
上皮
干细胞自我更新和分化过程中发挥的功能 (具体原理详见Wu和Luo, 2006)。
果蝇肠上皮损伤再生模型实验方法
A Method for Damage-induced Regeneration of the Intestinal Epithelium in
Drosophila
Authors:
胡九龙
袭荣文
and
date:
06/20/2019,
view:
7138,
Q&A:
0
果蝇
肠道
是由平滑肌围裹的单层管状
上皮
结构构成。
果蝇
的肠腔由内到外分别为围食膜、肠
上皮
层、基底膜和平滑肌层。 两天后,将
果蝇
转移到正常食物管中培养,添加少许酵母,培养7~14天。取400 μl PBS溶液于EP管中。用镊子将
肠道
取出放入EP管中。
果蝇
肠道
详细解剖步骤见Chen等 (2016a) 发表的论文。 根据我们的经验,5% DSS处理两天后
果蝇
死亡率大概为10%。由于
肠道
中各区段干细胞的活性不一
果蝇肠上皮的免疫荧光染色
Immunofluorescence Staining of
Drosophila
Intestinal Epithelium
Authors:
金真
袭荣文
and
date:
06/20/2019,
view:
7261,
Q&A:
1
野生型雌性
果蝇
成虫肠
上皮
免疫荧光染色注意事项
果蝇
肠道
解剖完成之后要尽快进行固定,以确保信号的真实有效性,固定失败会导致信号弥散。 结果与分析野生型雌性
果蝇
成虫肠
上皮
免疫荧光染色图 (图2)。 ,继续向两端拖拽直至暴露出
果蝇
中肠末端;1.5通过左右镊子配合,一把镊子轻轻夹住
肠道
两侧固定
肠道
,另一把镊子拖拽
果蝇
体壁将
肠道
前端和后端分别从体壁中脱离出来 (图1A);1.6用镊子夹断有大量马氏管的后肠部分和
果蝇肠上皮干细胞谱系示踪
Lineage Tracing in
Drosophila
Intestinal Stem Cells
Authors:
郭兴庭
袭荣文
and
date:
06/20/2019,
view:
6182,
Q&A:
0
对解剖出来的
果蝇
肠道
进行固定,脱水,免疫荧光染色及制片,详细步骤参见“
果蝇
肠
上皮
的免疫荧光染色” (金真和袭荣文,2019)。 结果与分析DAPI作为一种常用的DNA染料,可以标记出肠
上皮
细胞核的形态。其中,
肠道
干细胞,
肠道
前体细胞以及内分泌细胞都是二倍体的小核细胞,而肠吸收型细胞是多倍体的大核细胞。
果蝇
肠
上皮
的免疫荧光染色. Bio-101 e1010270. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010270. Ev