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利用体外合成带生物素标记的RNA富集细胞裂解液 中与之互作的蛋白的方法
A Method for Purifying RNA Interacting Proteins from Cell Lysates by Using in vitro Synthesized Biotin-labeled RNA
Authors:  朱林王会丽, 王栋 and date: 09/27/2022, view: 1864, Q&A: 0
RNA pull down实验首先将体外合成带有生物素标记的RNA与细胞裂解液进行孵育，接着用 链霉亲和素磁珠富集生物素标记的RNA，同时获得RNA-靶蛋白复合体。 体外转录RNA复性：取50 pmol体外转录得到的带有生物素标记的LINC00973 RNA (稀释至终体积约10-50 μl即可) 于 200 μl PCR管中，在65 °C水浴锅中加 热5 min， (见溶液配方) 仪器设备移液器磁力架水浴锅4 °C冰箱-80 °C冰箱恒温金属浴震荡仪4 °C离心机Nanodrop分光光
细胞RNA Pulldown实验——利用体外合成带生物素标记的RNA检测细胞裂解液中与目标RNA互作的蛋白的方法
RNA Pulldown Assay
Authors:  桑凌杰瞿蕾, 陈怡君, 林爱福 and date: 09/15/2022, view: 2078, Q&A: 0
RNA-蛋白孵育：5.1取预清洗好的包含有1mg蛋白的细胞裂解液各1 mg于两个新1.5 ml EP管中，加2 μl RNase Inhibitor，再分别加2 μg Biotin 标记的正义及反义对照 buffer (见溶液配方) 10x PBS buffer (见溶液配方) 仪器设备小型低温离心机移液器移液枪磁力架旋转仪伯乐电泳仪伯乐转膜仪恒温金属浴震荡仪实验步骤体外转录：1.1体外转录RNA的Biotin标记 20 μl RNA polymerase (T7 or Sp6，产生正义或者反义的RNA) 2 μl 注: