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微生物群落RNA稳定同位素探针技术 (RNA-SIP)
RNA-Stable Isotope Probing for Microbial Communities
Authors:  张璐鞠峰 and date: 03/25/2021, view: 4564, Q&A: 0
... 等密度梯度离心 将离心管对称放入Vti65.2垂直转头中，加盖管帽，旋紧旋盖，空孔无需加盖。设置125,000 x gav，20 °C离心42-65 h，加速度设为最大，减速度设为无刹车。 ，其他实验条件与标记实验组 (如13C和15N等)相同，以在结果分析中去除高GC含量RNA微生物及RNA扩散等因素导致的假阳性结果；2) 采用标记程度高的底物 (理想情况下，原子百分比 > 99% : 343890；可选)实验步骤稳定同位素标记底物培养实验需注意如下几点 (Lueders, 2015; Whiteley e
人外周血免疫细胞亚群25色流式全景分析
Immune Cell Landscape of Human Peripheral Blood by 25 Colors Flow Cytometry
Authors:  章晶晶沈蕾 and date: 11/20/2019, view: 19278, Q&A: 0
... 密度梯度离心上样结果示意图400 x g，20 min，升速 (ACC) 1，降速 (DEC) 0，室温进行密度梯度离心。 密度梯度离心产物示意图视频1. 吸取密度梯度离心后中间层淋巴细胞和单核细胞的过程 离心结束后去上清，轻弹管底，再加入10 ml PBS，上下颠倒后放入离心机400 x g，5 min室温离心。 人外周血免疫细胞的制备 (Gupta等，2013)准备洁净的15 ml离心管，倒入3 ml lymphoprep。 结果与分析本实验先根据细胞大小和包含的颗粒度，即FSC和SSC，将人
利用13C-DNA-SIP法示踪根际和菌丝际活性解磷细菌
13C-DNA-SIP Method for Tracing Rhizosphere and Hyphosphere Phosphate Solubilizing Bacteria
Authors:  周家超冯固 and date: 04/13/2021, view: 3760, Q&A: 0
... 密度梯度离心后DNA拷贝数在不同分层的分布如图2所示。 图2. 密度梯度离心后R.i和G.m菌丝际DNA在不同浮力密度分层中的分布十二、 高通量测序 根据密度梯度离心后每一层q-PCR结果，每个处理挑选浮力密度约为1.58的那一层DNA样品进行高通量测序 δ13C‰以V-PDB (维也纳-佩迪-贝勒姆尼) (Deniro等，1978) 为标准计算，方程式如下： δ13C ‰=(R样品/R标准品-1)×1000 式中，δ13C为样品碳同位素比值，单位为千分之一 土壤滤液是通过将30 g未经灭菌的新鲜土
肠道固有淋巴样细胞亚群分类及表型检测
Classification and Phenotype Analysis of Mouse Intestinal Innate Lymphoid Cells (ILCs)
Authors:  章晶晶沈蕾 and date: 11/20/2019, view: 13568, Q&A: 2
... 密度梯度离心后得到的产物示意图视频2. 现用现配40% percoll和80% percoll用于密度梯度离心。 另外，ILC2表面高表达IL-2受体CD25、IL-33受体ST2、IL-25受体IL-17RB等，在常见的哮喘、过敏等二型免疫反应中，ILC2会接受上游IL-33、IL-25、TSLP等信号的刺激后活化 吸取密度梯度离心后中间层细胞的过程 用5 ml PBS重悬细胞沉淀，400 x g、5 min室温离心后去除上清，得到肠道固有层淋巴细胞，活细胞计数后，可用于后续实