... 为制备成最终可以直接分装至细胞实验板内开展RNAi筛选的siRNA溶液，我们利用Beckman公司的Biomek FX自动化液体工作站，按照图1所示步骤，首先使用1× siRNA 缓冲液充分溶解siRNA 在开展筛选实验前，将工作板内的siRNA整板转移至筛选项目所用的指定实验板内用于整板转染和筛选。图1. 按照此流程，1套工作板仅用于两轮筛选 (每轮筛选按3个重复计算)。 按一步稀释的流程，1套工作板可用于4轮筛选。 从多个siRNA筛选

... 转染时间及siRNA浓度 我们利用Dharmacon公司的全基因组siRNA文库开展RNAi筛选时，siRNA的工作浓度一般选择20 nM，转染后48-96 h开展检测。 若筛选体系有已知的阳性基因，可根据阳性基因siRNA出现表型的时长确定筛选体系的时长。 反式转染是高通量siRNA筛选的主要转染方式，下文重点介绍反式转染的条件优化方法。 ，文库制备和筛选实验开展的时间安排相对灵活。 每孔转染试剂的用量需要同时考虑转染效率、转染毒性及高通量筛选的成本。提高转染

尽管如此，GD文库被成功地应用于多个全基因组或大规模体内RNAi筛选。 从Flybase基因的JBrowse可以很方便地看到每个RNAi所针对的序列。如果没有额外的RNAi品系，则需要使用相应文库的载体自己克隆并构建新的RNAi品系。 RNAi实验一般在25~29 °C进行，由于Gal4的活性受温度影响，因此更高的温度会提高RNAi效率。 另一个增强RNAi效果的方法是过表达Dicer2 (Dcr2)。 采用sgRNA验证RNAi