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细胞铺板

刘柳 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1011
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视频简介细胞铺板,英文为seeding cells,是体外药理实验中基本技能,决定着实验的成败。但是往往会出现铺板不匀的问题,细胞不匀导致的接触抑制使实验数据的可信度大打折扣。一般来说细胞铺板不匀有几大常见原因,包括:1.消化过度,因此要对自己的细胞消化时间足够了解;2.吹打次数不够,细胞悬液不均匀,但也不应吹打太猛,会造成细胞损伤。最后在显微镜下观察的时候不可以再大幅度晃动哦,轻轻转移至培养箱中即可(PS:在开关培养箱门的时候要轻哦,震荡也会是细胞悬液晃动,导致细胞铺板不匀)。
  • 视频介绍

一、视频摘要
细胞铺板是体外药理实验中基本技能,为了后续相关实验将细胞均匀的铺到6孔板中以方便后续操作。


二、关键词

肝细胞;6孔板;铺板


三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

BRL-3A大鼠肝细胞


2. 试剂和耗材

试剂:10%FBS培养基、胰酶、PBS75%酒精

耗材:T25培养瓶、6孔板、15ml离心管、200μL1mL枪头


3. 仪器和软件

离心机,水浴锅,移液枪,显微镜,抽吸泵,离心管



四、实验操作

1.吸除T25培养瓶内旧的培养液,在T25培养瓶内打入1mlPBS清洗并吸除;

2. T25培养瓶中打入1ml的胰酶消化细胞,将T25培养瓶放入培养箱中消化1-2分钟;

3.取出T25培养瓶,显微镜下观察消化情况,在T25培养瓶中打入1ml10%FBS培养基终止消化;

4.将细胞悬浮液转移至15ml离心管中,以900rpm的转速离心5分钟;

5.离心机中取出离心管,管底可见细胞沉淀,吸除离心管中上清液,注意不要吸到细胞沉淀;

6.在离心管中加入1ml10%FBS培养液,吹打混匀制成细胞悬浮液并计数;

7.配制需要铺板浓度的细胞混悬液,将6孔板打开,写上信息;

8.每个孔打入2mL的细胞悬液,静置后显微镜下观察每个孔的细胞数是否均匀;

9.6孔板放入培养箱中继续培养。



五、注意事项

1.消化过度,因此要对自己的细胞消化时间足够了解;2.吹打次数不够,细胞悬液不均匀,但也不应吹打太猛,会造成细胞损伤。最后在显微镜下观察的时候不可以再大幅度晃动哦,轻轻转移至培养箱中即可(PS:在开关培养箱门的时候要轻哦,震荡也会是细胞悬液晃动,导致细胞铺板不匀);3.在铺板完成后尽量少顺时针或逆时针晃动以免造成每个孔中间细胞密度过低。

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