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Graphpad Prism软件分析CCK-8实验结果

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视频简介CCK-8是一种考察细胞活力、药物效果的常用技术,具有操作简便和细胞毒性低的优势,在细胞生物学、药理学和肿瘤学等研究中广泛使用。随着科研人员的摸索,CCK-8数据分析方法也从最初的直接根据吸光度计算发展为今日的引入两组对照的方法,以排除培养基颜色和细胞状态等对结果的影响。面对酶标仪输出的复杂数据矩阵,你是否还在对数据处理感到困惑?CCK-8结果处理方法并不是唯一的,本视频手把手教学用Excel和GraphPad软件处理CCK-8实验结果的方法之一,包括计算细胞活力与药物IC50并进行组间差异分析。
  • 视频介绍

一、视频摘要

CCK-8是一种考察细胞活力、药物效果的常用技术,具有操作简便和细胞毒性低的优势,在细胞生物学、药理学和肿瘤学等研究中广泛使用。本视频使用ExcelGraphPad软件处理CCK-8实验结果——借助培养基对照和单独细胞对照数据计算细胞活力与药物IC50并进行组间差异分析。

CCK-8 is a common technique for investigating cell viability and drug effect. It has the advantages of simple operation and low cytotoxicity, and is widely used in cell biology, pharmacology, and oncology research. This video uses Excel and GraphPad software to analyze CCK-8 results—calculate cell viability and drug IC50 with the reference of cells absorbance and medium absorbance values and analyze differences between groups.


二、关键词

细胞增殖;CCK-8细胞计数;半抑制浓度;GraphPad Prism软件

Cell proliferation; Cell Counting Kit-8; Half maximal inhibitory concentration (IC50); GraphPad Prism software


三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

不同干预条件的待测细胞。


2. 试剂和耗材

CCK-8检测液,培养基,96孔板,灭菌吸头。


3. 仪器和软件

多波长酶标仪,细胞培养箱,生物安全柜,Excel软件,GraphPad Prism软件。


四、实验操作

  1. 根据96孔板布板设计,在Excel软件中整理实验原始数据(吸光度)。

  2. 计算A0加药)(具有细胞、CCK8溶液而没有药物溶液的孔)和A(空白)(具有培养基和CCK8溶液而没有细胞的孔)的均值。

  3. 根据公式:细胞存活率*%=[A(加药)-A(空白)]/[A0加药)-A(空白)]*100和细胞抑制率*%=[A0加药)-A(加药)]/[A0加药)-A(空白)]*100计算细胞活力与抑制率。

  4. 打开GraphPad Prism软件,新建XY模式,根据需要选择重复数,将Excel计算好的数据导入GraphPadX值为药物浓度,Y值为细胞活力(或抑制率)。

  5. 点击“Analyze”中的“Transform concentrations (X)”,选择“Transform to logarithms”的“log10 (common)”,将X值(药物浓度)转化为以10为底的对数。

  6. 在新的数据界面下点击“Analyze”,在“XY analyses”中选择“Nonlinear regression (curve fit)”进行非线性拟合,选择“Dose-response-inhibition”中的“log(inhibitor) vs. normalized response -- Variable slope”模式绘图并计算IC50值。

  7. 新建Column模式,选择“Enter replicate values, stacked into columns”,导入数据,每列为一个药物浓度。

  8. 点击“Analyze”,在“Columns analyses”中按需求进行统计描述(Descriptive statistics)、正态性检验(Normality and Lognormality Tests)和单因素方差分析(One-way ANOVA)等,在进行单因素方差分析时也可进行两两比较(Multiple Comparisons)。


五、注意事项

Excel进行数据处理时要善于运用函数和“$”符号,“$”可以通过绝对引用来限定读取某一个单元格的值(CCK-8数据处理时经常需要绝对引用两个对照组的均值)。从Excel将数据复制到GraphPad时要善于使用转置(Paste Data Transposed),以应对不同的数据排列格式,提高工作效率。

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