一、视频摘要
细胞计数对实验至关重要，有时花费一天的时间制备细胞，对细胞进行染色、分选，但如果细胞数量不够实验也无法继续进行下去。目前常用的细胞计数方法是显微镜和血球计数板或使用自动细胞计数仪。两种方法各有其优势，本视频分别使用两种方法测量细胞数量，比对实验步骤和计数结果，以供参考。
二、关键词
自动细胞计数仪、血球计数板、支持细胞
三、实验样品、试剂、耗材或仪器
1. 样品
支持细胞
2. 仪器
血球计数板
显微镜
移液枪
自动细胞计数仪
四、实验操作
（一）血球计数板的使用
以计数支持细胞为例
(1)用血球计数板计数支持细胞悬液的细胞个数.
(2)样品稀释的目的是便于悬液的计数,以每小方格内含有4-5个细胞为宜,一般稀释10倍即可.
(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.
(4)将稀释后的细胞悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使液体缓缓渗入,多余的液体用吸水纸吸取,捎待片刻,使细胞全部沉降到血球计数室内.
(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的细胞数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的细胞数.
(6)当遇到位于大格线上的细胞,一般只计数大方格的上方和右方线上的细胞(或只计数下方和左方线上的细胞).
(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml液体中所含的细胞个数.
计算公式
(1)16格×25格的血球计数板计算公式:
细胞数/ml=100小格内细胞个数/100×400×104×稀释倍数
(2)25格x16格的血球计数板计算公式:
细胞数/ml=80小格内细胞个数/80×400×104×稀释倍数
（二）自动细胞计数仪
1.按下电源(Power)按钮，开启仪器。显示开启界面。
2.自动细胞计数仪预设为细胞(Cell)模式。
3.将10 μL样本混合物加入到细胞计数板一侧的计数池口中。计数板的两个计数池分别标记为“A”和“B”，可以用一个计数池进行细胞计数，也能够两个同时使用。
4.插入细胞计数板，先把A侧样本插入到细胞计数板接口，保证A侧样本插入到仪器中。若细胞计数板插入正确，那么就会听到咔嗒一声。每个计数池单独计数。
5.按下计数细胞(CountCells)或下一个样本(NextSample)按钮。
6.按缩放(Zoom)按钮调节图像。在网格中通过点击目标区域来导航。
7.如果图像效果好的话，按下计数细胞(CountCells)。
8.仪器完成一个样本的计数大概需要30秒，屏幕上会显示活细胞数、死细胞数、细胞总数以及存活率百分比。记录细胞计数结果，或插入USB驱动器，保存(Save)数据。
9.计数完成后，按下详情(Details)按钮，查看每个细胞的计数情况。细胞情况通过不同颜色显示。
10.如果查看数据详情及图示数据，请选择更多数据(MoreData)按钮。
11.计数板A侧完成计数后，先将计数板轻轻向里一推，然后再拉出来，拿开计数板，对计数池的另一侧进行细胞计数(B侧)。把计数板转过来，再插入细胞计数板接口，重新开始计数。
12.自动细胞计数仪的内存只能保存一组数据。所以每次读数后，记录或保存好数据。
13.记录或保存数据后，计数板不能重复使用请妥善处理。
14.这个时候，细胞计数仪已准备好，可以检测下一个样本。如果不再使用仪器，按电源(Power)按钮关闭仪器。
五、注意事项
血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.
六、结果分析
采用血球计数板获得的信息仅限于样本中的总细胞数、活细胞数和死细胞数。自动细胞计数仪还可以获得的数据包括平均细胞大小以及基于荧光强度或活细胞和死细胞大小的细胞分布直方图
。
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