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细胞培养之细胞复苏

缪欣宇曾曌月 |  2022-11-23  | DOI: 10.21769/BioProtoc.v1052
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视频简介细胞复苏是与细胞冻存相反的过程,即是细胞恢复生长的过程,是将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养。当恢复到常温状态时,细胞的形态结构保持正常,生化反应即可恢复。需要用到的试剂、耗材、仪器包括:完全培养基,25ml培养瓶,3ml巴氏吸管,15ml离心管;显微镜,超净台,离心机,水浴锅。
  • 视频介绍
一、视频摘要

细胞复苏,是指将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养,细胞恢复生长的过程。休眠的细胞重新活化,进入细胞周期,重新获得细胞类型特异的生物学功能。细胞复苏是细胞培养中基础且关键的一步。



二、关键词

细胞培养 细胞复苏

三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器

1.样品信息

Hepa1-6细胞:C57/L小鼠中产生的BW7756小鼠肝癌细胞的衍生株,上皮样细胞 ,贴壁生长。


2.试剂和耗材

1.DMEM高糖培养基2.T25培养瓶3.15ml离心管4.5ml巴氏灭菌吸管5.胎牛血清6.双抗(青霉素-链霉素)


3.仪器和软件

1.显微镜2.CO2培养箱3.无菌工作台4.高速离心机



四、实验操作

1.将实验耗材放入无菌工作台内紫外照射30min

2.从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,摇动令其尽快融化

3.取出冻存管,用吸管吸出细胞悬液,加入离心管内并加入2倍体积以上含有10%胎牛血清、1%双抗的培养基(完全培养基),吸管吹打混匀

4.离心管放入离心机,配平后,12000rpm,5min

5.弃去上清液,加入完全培养基重悬细胞,接种培养瓶

6.37℃培养箱静置培养

7.次日更换一次培养液,继续培养


五、注意事项

1.注意无菌操作

2.次日更换培养基 观察细胞状态

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