一、视频摘要
细胞复苏,是指将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养,细胞恢复生长的过程。休眠的细胞重新活化,进入细胞周期,重新获得细胞类型特异的生物学功能。细胞复苏是细胞培养中基础且关键的一步。
二、关键词
细胞培养
细胞复苏
三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1.样品信息
Hepa1-6细胞:C57/L小鼠中产生的BW7756小鼠肝癌细胞的衍生株,上皮样细胞 ,贴壁生长。
2.试剂和耗材
1.DMEM高糖培养基2.T25培养瓶3.15ml离心管4.5ml巴氏灭菌吸管5.胎牛血清6.双抗(青霉素-链霉素)
3.仪器和软件
1.显微镜2.CO2培养箱3.无菌工作台4.高速离心机
四、实验操作
1.将实验耗材放入无菌工作台内紫外照射30min
2.从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,摇动令其尽快融化
3.取出冻存管,用吸管吸出细胞悬液,加入离心管内并加入2倍体积以上含有10%胎牛血清、1%双抗的培养基(完全培养基),吸管吹打混匀
4.离心管放入离心机,配平后,12000rpm,5min
5.弃去上清液,加入完全培养基重悬细胞,接种培养瓶
6.37℃培养箱静置培养
7.次日更换一次培养液,继续培养
五、注意事项
1.注意无菌操作
2.次日更换培养基
观察细胞状态
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