一、视频摘要
本实验使用Gibson
Assembly的方法在SnapGene软件上进行质粒图谱的绘制。通过质粒图谱的绘制,可以直观的了解引物设计、PCR、Gibson
Assembly。所得到的质粒图谱及绘制流程可用于论文的结果图。
二、关键词
Gibson
Assembly、质粒图谱绘制、SnapGene、PCR
三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器
1.样品信息
无
2.试剂和耗材
无
3.仪器和软件
NCBI网址:National
Center for Biotechnology Information (nih.gov)
软件:SnapGene3.2.1
四、实验操作
1、在NCBI网站查找淀粉酶基因amyS,将序列导入SnapGene上,更改基因名称,添加Features;网页上查找任意一个质粒pGAPZA,将序列导入SnapGene上,更改质粒名称,添加Features。
2、根据引物设计的原则,设计扩增amyS与pGAPZA的引物,其中amyS的扩增引物需带有与pGAPZA的扩增引物20bp左右的同源片段。
3、在SnapGene上,进行Gibson
Assembly的操作,得到可表达目的基因的表达载体。
五、注意事项
1、引物设计时注意引物的方向。
2、在SnapGene上,进行Gibson
Assembly的操作时注意引物的方向。
六、结果分析(可选)
七、参考文献(可选)
Daniel
G. Gibson, Synthesis of DNA fragments in yeast by one-step assembly
of overlapping oligonucleotides, Nucleic
Acids Research,
Volume 37, Issue 20, 1 November 2009, Pages 6984–6990
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